Page 49 - 《中国药房》2023年8期
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3.2 CHCR抗ER阳性乳腺癌作用机制的预测结果                                    100
          3.2.1 CHCR 活性成分筛选及其成分靶点预测 从                                   80
         “3.1”项下所鉴定出的 58 个化学成分中，筛选出 38 个活                              抑制率/%  60
          性成分，共得到成分靶点651个。                                              40
          3.2.2 ER 阳性乳腺癌疾病靶点的筛选结果 在 Gene                                20
          Cards、OMIM、DrugBank 3 个数据库中共获得疾病靶点                             0
                                                                           0.062 5   0.125        0.25        0.5              1             2
          1 593 个；通过 Venny 2.1.0 平台获得“成分-疾病”交集靶                                    CHCR/（mg/mL）
          点180个。                                             图3 CHCR对MCF-7细胞的增殖抑制作用（x±s，n＝6）
          3.2.3 PPI网络的构建及核心靶点筛选 对“3.2.2”项下                   3.3.2 CHCR对PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响 不
         “成分-疾病”交集靶点的PPI网络进行拓扑学分析，取大                         同浓度的 CHCR 均可显著降低 MCF-7 细胞中 p-PI3K、
          于 2 倍平均度值的靶点为核心靶点，共 38 个，包括                        p-Akt蛋白的表达水平（P＜0.01），而对PI3K、Akt蛋白的
          ESR1、Akt1、磷 酸 肌 醇 3 激 酶 调 节 亚 单 位 1（phos‐          表达水平均无明显影响（P＞0.05），结果见图4。这说明
          phoinositide-3-kinase regulatory subunit 1，PIK3R1）等。  CHCR可抑制MCF-7细胞的PI3K/Akt信号通路，与网络
          3.2.4 GO/KEGG 富集分析及“活性成分-靶点-通路”网                   药理学预测结果基本一致。
          络的构建 通过GO功能富集分析获得258个GO条目，                              p-PI3K                           110 kDa
          包括 171 个生物过程条目、31 个细胞组分条目、56 个分                          PI3K                            110 kDa
          子功能条目。其中，生物过程涉及信号转导、蛋白质磷                                 p-Akt                           60 kDa
          酸化、RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控等；细胞组分                                Akt                            60 kDa
          主要涉及胞浆、细胞核区域等；分子功能主要涉及蛋白                                β-actin                          42 kDa
          激酶结合活性、腺嘌呤核苷三磷酸结合活性等。通过                                      空白对    阳性对   600   300   150
                                                                        照组    照组      CHCR/（μg/mL）
          KEGG富集分析获得通路137条，与CHCR抗ER阳性乳
                                                                              A.各组蛋白表达电泳图
          腺癌作用密切相关的信号通路主要包括：雌激素信号通                             120                PI3K  120               Akt
          路（estrogen signal pathway）、PI3K/Akt 信号通路（PI3K/               a          p-PI3K        a         p-Akt
          Akt signal pathway）、红细胞癌基因 B 信号通路（ErbB               80                  b    80             b   b
          signal pathway）等。进一步构建“活性成分-靶点-通路”                  目的蛋白表达水平     b   b       目的蛋白表达水平     b
          网络，结果显示，CHCR 所含同一化合物可作用于不同                           40                       40
          靶点，不同化合物也可作用于同一靶点，充分体现出
                                                                0                        0
          CHCR多成分、多靶点的抗ER阳性乳腺癌机制，结果见                             空白对 阳性对 600    300   150  空白对 阳性对 600    300   150
                                                                  照组  照组   CHCR/（μg/mL）    照组  照组  CHCR/（μg/mL）
          图2。具体成分代号见表2。                                           B.各组细胞PI3K、p-PI3K         C.各组细胞Akt、p-Akt
                                                                     蛋白表达柱形图                  蛋白表达柱形图
                                                                a：与空白对照组比较，P＜0.05；b：与空白对照组比较，P＜0.01
                                                             图4 CHCR 对 MCF-7 细胞 PI3K/Akt 通路蛋白表达的
                                                                  影响
                                                             3.3.3 CHCR 对雌激素信号通路的影响 不同浓度的
                                                             CHCR 均可显著下调 ERα 蛋白的表达水平和 ESR1
                                                             mRNA 的 表 达 水 平（P＜0.01），结 果 见 图 5。 这 说 明
                                                             CHCR可以抑制MCF-7细胞中雌激素信号通路，结果与
                                                             网络药理学预测结果基本一致。
                                                             4 讨论
                                                                 在我国，中医药疗法已成为乳腺癌治疗的重要手段
             GY：白屈菜和元胡共有成分；BQC：白屈菜成分；YH：元胡成分                 之一。CHCR传统水煎液的临床疗效明确，但药效物质
               图2 CHCR“活性成分-靶点-通路”网络图
                                                             基础尚不清楚。与水相比，乙醇对植物细胞的穿透能力
          3.3 体外细胞实验验证结果
                                                             较强，采用乙醇提取可获得更多的成分。基于此，本研
          3.3.1 CHCR 对 MCF-7 细胞的增殖抑制作用 CHCR                  究首先采用乙醇提取CHCR，再以UPLC-Q-TOF-MS/MS
          作用于 MCF-7 细胞 48 h 后，随着药物浓度的增加，细胞                   技术对该提取物的化学成分进行定性分析，初步鉴定出
          抑制率逐渐升高，有一定的浓度依赖趋势，结果见图 3。                         58个成分。其中，延胡索乙素可通过诱导细胞周期阻滞
          CHCR 作用于 MCF-7 细胞的 IC50为 693 μg/mL，长春新             从而抑制ER阳性乳腺癌细胞的增殖 ；小檗碱、白屈菜
                                                                                             [14]
          碱的IC50为0.528 μg/mL。                                碱、白屈菜红碱也均具有良好的抗乳腺癌作用                   [15―17] 。


          中国药房  2023年第34卷第8期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 8    · 939 ·
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