Page 46 - 《中国药房》2023年8期
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L. 的干燥全草，味苦、性凉，具有镇痛、止咳、解毒之功                         Akt、PI3K、β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗体（批号分别为
            [7]
          效 。相关研究指出，白屈菜中的白屈菜碱可通过抑制                            L07130940、M04070003、M06243380、N09271372）均购
          p65核转位、抑制核因子κB信号转导而促进MCF-7细胞                        自沈阳万类生物科技有限公司；兔源磷酸化PI3K（phos‐
          凋亡 ；白屈菜红碱可通过调控磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白                         phorylated  PI3K，p-PI3K）、磷 酸 化 Akt（phosphorylated
              [8]
          激 酶 B（phosphatidylinositol-3-kinase/protein  kinase  B，  Akt，p-Akt）多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊
          PI3K/Akt）信号通路和血管内皮生长因子（vascular endo‐               抗兔 IgG 二抗（批号分别为 AG20900287、AE04205649、
          thelial growth factor，VEGF）信号通路来抑制乳腺癌的发             BJ08079044）均购自北京博奥森生物技术有限公司；
                [9]
                                                                       TM
          生发展 。元胡为罂粟科植物延胡索 Corydalis yanhu‐                   PrimeScript  RT reagent kit with gDNA eraser 试剂盒、
                                                                                  TM
          suo W. T. Wang的干燥块茎，其性温、味辛苦，具有活血、                   TB Green  Premix Ex Taq  试剂盒（批号分别为RR047A、
                                                                     TM
                         [7]
          利气、止痛之功效 。相关研究指出，元胡提取物可通过                           RR420A）均购自宝日医生物技术（北京）有限公司；甲
          诱导活性氧生成和阻滞 G2/M 细胞周期来抑制 MCF-7                       醇、乙腈、甲酸均为分析纯，其余试剂均为分析纯或实验
                    [10]
          细胞的增殖 ；其所含脱氢紫堇碱可通过调节 B 细胞淋                          室常用规格，水为蒸馏水。
          巴瘤 2（B cell lymphoma-2，Bcl-2）和 Bcl-2 相关 X 蛋白        1.3 细胞
         （Bcl-2 associated X protein，Bax）之间的比例来介导细胞               人乳腺癌 MCF-7 细胞由哈尔滨商业大学药物工程
                                        [11]
          凋亡，从而抑制MCF-7细胞的增殖 。可见，白屈菜、元                         技术研究中心提供。
          胡具有明确的抗乳腺癌作用，笔者推测CHCR亦有抗乳                           2 方法
          腺癌作用。研究 CHCR 抗乳腺癌作用并阐明其作用机                          2.1 CHCR的成分分析
          制，对于扩大药对的适用范围，以及指导中医临床乳腺                            2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取白屈菜碱、延胡索
          癌的治疗具有较高的研究价值。基于此，本研究采用超                            乙素、原阿片碱、四氢黄连碱对照品各1 mg，分别加甲醇
          高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-Q-                          超声溶解并定容于5 mL容量瓶中，制成质量浓度均为0.2
          TOF-MS/MS）技术分析 CHCR 的化学成分，利用网络药                     mg/mL的对照品溶液，经0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。
          理学方法筛选其治疗ER阳性乳腺癌的潜在作用靶点和                            2.1.2 供试品溶液的制备 称取白屈菜、醋制元胡粉末
          通路并进行体外实验验证，以期为CHCR在乳腺癌临床                           各5 g，加10倍量95%乙醇超声提取2 h，过滤；药渣以同
          治疗中的应用及相关药物的开发提供科学依据。                               法再提取1 h，过滤；合并2次滤液，浓缩，得浸膏（1 mg浸
          1 材料                                                膏相当于15 mg生药）。取上述浸膏，加甲醇复溶并定容
          1.1 主要仪器                                            于 25 mL 容量瓶中，制成质量浓度为 0.08 g/mL（以浸膏
              本研究所用主要仪器包括液相色谱-G6500 系列四                       量计）的药对供试品溶液，经 0.22 μm 微孔滤膜过滤，
          极杆飞行时间质谱联用仪（美国 Agilent 公司）、CO-150                   备用。
          型二氧化碳培养箱（美国NBS公司）、iMark型酶标仪[伯                       2.1.3  色 谱 条 件 与 质 谱 条 件 （1）色 谱 条 件 ：以
          乐生命医学产品（上海）有限公司]、DYCZ-24DN型电泳                       ACQUITY UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）为
          仪（北京六一生物科技有限公司）、ImageQuant LAS500                   色谱柱，0.1%甲酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度
          型分子生物成像仪（GE 通用电器医疗集团生命科学                            洗脱（0～4 min，20%B；4～17 min，20%B→22%B；17～
          部）、Easy Cycler 96 型聚合酶链式反应（PCR）仪（德国                 19 min，22%B→100%B；19～24 min，100%B→15%B）；
                                  TM
          Biometra公司）、QuantStudio  1型实时荧光定量PCR仪               流速为 0.3 mL/min；柱温为 30 ℃；检测波长为 269 nm；
          [英潍捷基（上海）贸易有限公司]等。                                  进样量为0.2 μL。（2）质谱条件：采用电喷雾离子源进行
          1.2 主要药品与试剂                                         正、负离子模式扫描；离子源温度为550 ℃；正负离子源
              实验所用白屈菜药材、醋制元胡饮片均购自哈尔滨                          电压分别为 5 500、－4 500 V，裂解电压分别为 80、－80
          三棵树中药材专业市场，经哈尔滨商业大学药学院曲中                            V；碰撞能分别为 35、－35 eV，碰撞能扩展分别为 15、
          原教授鉴定分别为罂粟科植物白屈菜 C. majus L. 的干                     －15 eV；雾化气（gas1）压力为380 kPa，辅助气（gas2）压
          燥全草和罂粟科植物延胡索 C. yanhusuo W. T. Wang 的               力为 35 kPa，气帘气（curtain gas）压力为 240 kPa。一级
          干燥块茎醋炙品。上述药材/饮片粉碎后，备用。                              质谱母离子扫描范围为m/z 80～1 500；对信息依赖响应
              白屈菜碱、延胡索乙素、原阿片碱、四氢黄连碱对照                         值超过100 cps的8个色谱峰进行二级质谱扫描，子离子
          品（批号分别为DST220428-079、DSTDY010101、DSTD-              扫描范围为m/z 50～1 500。
          Y011301、DSTDS015801，纯度均不低于 98%）均购自成                 2.1.4 样品检测与数据处理 取“2.1.2”项下供试品溶
          都德思特生物技术有限公司；长春新碱对照品（阳性对                            液，按“2.1.3”项下色谱与质谱条件进样分析，将采集结果
          照，批号PCS-210402，纯度≥98%）购自北京中科质检生                     导入MassHunter软件，通过化合物质谱裂解规律、准分子
          物技术有限公司；胎牛血清购自美国 Gibco 公司；RPMI                      离子峰以及碎片离子信息与采集结果信息比对，对数据
          1640 培养液购自大连美仑生物技术有限公司；BCA 试                        进行分析，列出检测到的峰强度以保留时间和产生的质
          剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；兔源 ERα、                           量数据（m/z）对各峰进行标识，质量精确度小于10 ppm。


          · 936 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 8                               中国药房  2023年第34卷第8期
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