Page 40 - 《中国药房》2023年8期
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significantly increase the relative abundance of Bacteroidetes， and significantly reduce the relative abundance of Firmicutes and the
          ratio  of  Firmicutes  to  Bacteroidetes （P＜0.01）.  At  the  genus  level，  Ganbao  capsules  could  significantly  increase  the  relative
          abundance  of  Lactobacillus，  Blautia，  Bacteroides  and Akkermansia，  and  significantly  reduce  the  relative  abundance  of  Prevotella，
          Turicibacter， Weissella， SMB53 and Desulfovibrio （P＜0.05 or P＜0.01）. There were different species among the gut microbiota of
          rats  in  each  group.  CONCLUSIONS  Ganbao  capsules  may  improve  NAFLD  by  protecting  intestinal  mucosal  barrier  function  and
          regulating gut probiotics/harmful bacteria structure.
          KEYWORDS     Ganbao capsules； non-alcoholic fatty liver disease； intestinal mucosal barrier； gut microbiota； 16S ribosomal RNA



              非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，    联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，
          NAFLD）是指除酒精和其他明确的肝损伤因素之外，以                          ELISA）试剂盒（批号分别为 A301B10755、A30610736、
          弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性和脂肪贮积为病理特征                             A38210815）均购于杭州联科生物技术股份有限公司；大
          的临床病理综合征，随病程发展，会演变为肝炎、肝纤维                           鼠脂多糖 ELISA 试剂盒（批号 202109）购于厦门慧嘉生
                            [1]
          化、肝硬化甚至肝癌 。我国 NAFLD 患病率高，且随着                        物科技有限公司；兔抗闭合蛋白（Occludin）抗体、兔抗闭
          现代生活方式和饮食结构的改变，呈持续上升态势，严                            锁小带蛋白-1（zonula occludens-1，ZO-1）抗体（批号均为
          重威胁人民健康。研究发现，肠道菌群失调会引起致病                            20220607）均购于北京索莱宝科技有限公司；辣根过氧
          菌过度繁殖，产生大量内毒素，从而破坏肠黏膜屏障，致                           化物酶标记的山羊抗兔IgG（批号GB23303）、DAB显色
          使大量内毒素入血，激活机体炎症反应，加剧NAFLD的                          试 剂 盒（批 号 G1212-200T）、苏 木 精 染 液（批 号
                  [2]
          病程进展 。在治疗NAFLD领域，中医药以其整体观念                          CR2112051）与伊红染液（批号 CR2202010）均购于武汉
          和辨证论治、多成分、多靶点、多途径的优势显示出独特                           赛维尔生物科技有限公司；DNA 提取试剂盒（批号
          的疗效。                                                M5635-02）购于美国Omega Bio-tek公司；水为蒸馏水。
              肝宝胶囊（批准文号闽药制字Z04107020）为福建医                     1.3 动物
          科大学孟超肝胆医院的院内中药制剂，由鲜青果、虎杖、                               SPF 级雄性 SD 大鼠，体质量 180～200 g，由上海斯
          莱菔子、麦芽、谷芽5味中药组成，具有清热利湿、消食降                          莱克实验动物有限责任公司提供，实验动物生产许可证
          脂、润肺化痰的功效，临床使用多年，疗效显著。本课题                           号 为 SCXK（沪）2017-0005。 大 鼠 饲 养 于 室 温 22～
          组 前 期 研 究 表 明 ，肝 宝 胶 囊 能 有 效 改 善 大 鼠 的              25 ℃、相对湿度40%～65%、12 h昼夜交替的环境中，自
          NAFLD ，其君药成分没食子酸和白藜芦醇能改善肠黏                          由饮食摄水，适应性喂养1周后用于实验。本实验方案
                 [3]
          膜屏障功能，重塑肠道菌群            [4―5] 。故本研究在前期药理            经福建中医药大学实验动物伦理委员会批准（批准文号
          实验的基础上，探讨肝宝胶囊对 NAFLD 大鼠肠黏膜屏                         FJTCM IACUC 2021086）。
          障和肠道菌群的影响，从而阐明其防治 NAFLD 的作用                         2 方法
          机制，为中医药治疗NAFLD提供实验依据。                               2.1 分组及给药
          1 材料                                                    26只大鼠中随机选择8只作为空白组，给予普通饲
          1.1 主要仪器                                            料喂养；剩余18只喂食高脂饲料，持续8周后，随机抽取
              本研究所用主要仪器包括AU5800型全自动生化分                        2只大鼠，采用苏木精-伊红（HE）染色法观察肝脏组织，
          析仪（美国 Beckman Coulter 公司）、xMark 型酶标仪（美              判断 NAFLD 是否造模成功。将 16 只造模成功大鼠按
          国 Bio-Rad 公司）、NanoDrop 2000 型超微量分光光度计               随机数字表法分为模型组和肝宝组，每组8只。肝宝组
         （美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、MiSeqPE300 型高       大鼠灌胃肝宝胶囊溶液（1 440 mg/kg，前期药理实验最
          通量测序仪（美国Illumina公司）、SP300S型全自动脱水                    佳给药剂量 ），空白组与模型组大鼠灌胃等体积蒸馏
                                                                        [3]
          包埋机和RM2235型病理切片机（上海徕卡仪器有限公                          水，每日1次，连续5周。
          司）、CX33型显微镜（日本Olympus公司）等。                          2.2 标本采集与处理
          1.2 主要药品与试剂                                             末次给药后，采用应激性排便法收集大鼠新鲜粪便
              肝宝胶囊（规格 0.34 g，批号 20210508）由福建医科                于无菌冻存管中，－80 ℃保存备用。末次给药12 h后，
          大学孟超肝胆医院制剂室提供；高脂饲料（87.3%基础饲                         麻醉大鼠，腹主动脉取血，室温静置2 h后，3 000 r/min离
          料+2% 胆固醇+10% 猪油+0.7% 猪胆盐）购于上海帆泊                     心 10 min，取血清，－80 ℃保存备用。大鼠取血后，处
          生物科技有限公司；丙氨酸转氨酶（alanine aminotrans‐                 死，解剖取肝脏和回肠组织，其中肝左叶和回肠组织用
          ferase，ALT）、天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase，     10%中性甲醛固定备用。
          AST）、甘油三酯（triglyceride，TG）测试盒（批号分别为                 2.3 血清肝功能和血脂指标测定
          20210924、20210923、20210924）均购于南京建成生物工                   严格按试剂盒说明书操作，用全自动生化分析仪检
          程研究所；大鼠白细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）、              测大鼠血清中ALT、AST和TG含量；用ELISA法检测血
          IL-6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶        清中脂多糖及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量。


          · 930 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 8                               中国药房  2023年第34卷第8期
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