Page 37 - 《中国药房》2023年8期
P. 37

高架十字迷宫实验














           旷场实验







                    A.对照组                  B.文法拉辛组              C.百合地黄汤多糖高剂量组           D.百合地黄汤多糖低剂量组
                                               图2 各组小鼠行为轨迹图
                                   表7 百合地黄汤对小鼠行为学指标的影响（x±s，n＝10）
                                     高架十字迷宫实验                     旷场实验
          组别                                                                       强迫游泳实验不动时间/s  悬尾实验不动时间/s
                                 OE/%         OT/%      自主活动总距离/cm    中心区域活动距离/cm
          对照组                  55.36±5.90    30.53±5.68  1 744.17±167.28  249.45±61.17  104.70±20.22  83.70±19.88
          文拉法辛组                60.58±3.75 a  42.10±6.18 a  2 044.52±209.25 b  421.25±115.40 a  62.90±11.22 a  61.20±17.92 a
          百合地黄汤多糖高剂量组          62.18±5.44 a  40.48±7.29 a  2 246.35±175.10 a  375.41±93.60 b  54.30±15.66 a  46.00±18.68 a
          百合地黄汤多糖低剂量组          63.93±4.26 a  37.26±6.62 a  2 001.83±214.73 b  335.17±76.14 b  65.00±18.59 a  64.22±14.99 a
             a：与对照组比较，P＜0.01；b：与对照组比较，P＜0.05
          2.4.3 神经递质检测 上述实验完成后，处死各组小                         年版《中国药典》（四部）相关要求，为百合地黄汤中多糖
          鼠，取其脑组织适量，加生理盐水匀浆，以3 000 r/min离                    的定量分析提供了方法依据。
          心 10 min，取上清液，采用 ELISA 法以酶标仪测定脑组                       本研究以水提醇沉法来提取百合地黄汤多糖，首先
          织中5-HT、NE、GABA、Glu水平。严格按照试剂盒说明                     采用Plackett-Burman实验设计，考察提取时间、加水量、
          书操作，结果见表 8。由表 8 可见，与对照组比较，各药                       醇沉浓度、醇沉时间、浸泡时间对百合地黄汤多糖得率、
          物组小鼠脑组织中5-HT、NE（百合地黄汤多糖低剂量组                        多糖含量的影响。Plackett-Burman 设计可通过比较各
          除外）、GABA 水平均显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01），                 因素水平与整体之间的差异性，进而从较多的因素中筛
          Glu 水平（百合地黄汤多糖低剂量组除外）均显著降低                         选出关键影响因素，可避免在后期优化时由于部分因素
         （P＜0.05或P＜0.01）。                                    影响不显著而浪费实验成本，大幅减少实验次数，明显
                                                                                 [12]
         表8 百合地黄汤多糖对小鼠脑组织中神经递质的影响                            提高实验效率和准确度 。Plackett-Burman设计共筛选
              （x±s，n＝10）                                     出影响百合地黄汤多糖提取的3个显著因素：提取时间、
          组别           5-HT/（ng/mL）  NE/（pg/mL）  GABA/（μmol/mL） Glu/（mg/mL）  加水量、醇沉浓度。随后，本研究采用 Box-Behnken 设
          对照组          277.83±77.03  979.82±180.46  5.55±0.96  37.28±10.38  计-响应面法，采用 3 因素 3 水平设计，结合实验操作和
          文拉法辛组        389.23±92.94 a  1 198.61±213.97 b  6.88±1.41 b  25.71±8.21 a
          百合地黄汤多糖高剂量组 458.87±128.46 a  1 210.54±201.29 b  7.90±1.87 a  27.84±6.56 b  实际生产，最终筛得百合地黄汤多糖最优提取工艺为加
          百合地黄汤多糖低剂量组 417.60±111.67 b  1 166.89±289.29  7.25±1.59 b  31.15±6.43  25 倍量水，提取 1.5 h，醇沉浓度 70%。验证实验结果提
             a：与对照组比较，P＜0.01；b：与对照组比较，P＜0.05                 示，上述工艺稳定、可行，可作为一种有效提取百合地黄
          3 讨论                                               汤多糖的方法。
              苯酚-硫酸法在中药多糖含量测定中应用广泛，但                             高架十字迷宫实验、旷场实验、强迫游泳实验、悬尾
          易受测定条件影响，因此本课题组前期对苯酚-硫酸法                           实验均是经典的行为学实验方法，是利用动物对新异环
          的测定条件进行了系统的方法研究，分别对苯酚浓度、                           境的探究特性与对高悬敞开环境的恐惧所形成的矛盾
          苯酚用量、硫酸用量、水浴时间、加热温度等因素进行了                          冲突状态，从而建立的一种急性应激性焦虑抑郁模型，
          单因素考察，最终获得了“2.2”项下实验条件；同时，本课                       具有操作简单快捷、实验动物敏感的优点，常用于抗焦
          题组对测定方法进行了方法学验证，其结果均符合2020                         虑抑郁药物的初筛及动物焦虑抑郁样行为的评价                      [13―15] 。


          中国药房  2023年第34卷第8期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 8    · 927 ·
   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42