Page 63 - 《中国药房》2023年7期

狼毒大戟中二萜类化合物DP抗白血病的作用机制研究
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马立威 1， 2＊ ，陈 哲 ，王文豹 ，张金玲 ，张洪涛 ，葛鹏玲 ，刘吉成 [1.齐齐哈尔医学院医药科学研究院（博士后
工作站），黑龙江 齐齐哈尔 161006；2.黑龙江中医药大学博士后流动站，哈尔滨 150040；3.齐齐哈尔医学院
公共卫生学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006；4.齐齐哈尔医学院药学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006；5.齐齐哈尔
医学院附属第三医院妇产科，黑龙江 齐齐哈尔 161099]
中图分类号 R966；R285 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）07-0825-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.07.11

摘 要 目的 探究狼毒大戟中二萜类化合物 12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯（DP）能否通过磷脂酰肌醇 3 激酶（PI3K）/蛋白激酶 B
（Akt）信号通路发挥抗白血病的作用，为将其开发成抗白血病新药提供实验依据。方法 以LY294002（PI3K特异性抑制剂）为工具
药，采用MTT、Annexin Ⅴ-FITC/PI、AO-EB染色法观察并测定DP作用24 h后对人原髓细胞白血病细胞HL60增殖、凋亡的影响；
采用 ELISA 法测定 DP 作用 24 h 后细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放量及细胞中胱天蛋白酶 3（caspase-3）、caspase-9 的活
性。采用实时荧光定量-PCR法检测DP作用24 h后细胞中caspase-3、caspase-9、叉头框O3a（FoxO3a）、B细胞淋巴瘤2细胞死亡的
相互作用介质（Bim）的mRNA转录水平；采用Western blot法检测细胞中磷酸化FoxO3a（p-FoxO3a）、磷酸化Akt（p-Akt）的蛋白表
达水平，并采用免疫染色法在激光共聚焦显微镜下观察细胞中 FoxO3a 蛋白核转位情况。结果 10 μmol/L DP 和 10 μmol/L DP+
LY294002对HL60细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用（P＜0.01）；5、10、20 μmol/L DP作用后的细胞均呈典型的凋亡形态学
特征，细胞培养液中LDH释放量和细胞中caspase-3、caspase-9活性均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），其作用具有一定的浓度依赖
性趋势；10 μmol/L DP和10 μmol/L DP+LY294002作用后细胞中caspase-3、caspase-9和Bim mRNA转录水平均显著升高（P＜0.05
或 P＜0.01），FoxO3a mRNA 转录水平和 p-FoxO3a、p-Akt 蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）；10 μmol/L DP+
LY294002组细胞可见FoxO3a蛋白的核转位变化，且该变化较LY294002组明显。结论 DP可通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制人
白血病HL60细胞增殖并诱导其凋亡。
关键词 狼毒大戟；12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯；人原髓细胞白血病细胞HL60；磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路

Study on the mechanism of diterpenoid DP from Euphorbia fischeriana against leukemia
MA Liwei ，CHEN Zhe ，WANG Wenbao ，ZHANG Jinling ，ZHANG Hongtao ，GE Pengling ，LIU Jicheng 1
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[1. Research Institute of Medicine and Pharmacy （Postdoctoral Workstation）， Qiqihar Medical University，
Heilongjiang Qiqihar 161006， China；2. Mobile Postdoctoral Station， Heilongjiang University of Chinese
Medicine， Harbin 150040， China；3. School of Public Health， Qiqihar Medical University， Heilongjiang Qiqihar
161006， China；4. School of Pharmacy， Qiqihar Medical University， Heilongjiang Qiqihar 161006， China；
5. Dept. of Obstetrics and Gynecology， the Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，
Heilongjiang Qiqihar 161099， China]

ABSTRACT OBJECTIVE To explore whether diterpenoid 12-deoxyphorbol-13-palmitate （DP） from Euphorbia fischeriana can
exert anti-leukemia effects through the phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/protein kinase B （Akt） signal pathway， and to provide
experimental evidence for developing it into a new anti-leukemia drug. METHODS Using LY294002 （PI3K specific inhibitor） as
tool drug， the effects of 24 h DP treatment on the proliferation and apoptosis of human myeloid leukemia HL60 cells were detected
by MTT method， Annexin Ⅴ -FITC/PI staining and AO-EB staining. ELISA method was used to detect lactic dehydrogenase
（LDH） release and the activities of cysteinyl aspartate specific proteinase 3 （caspase-3） and caspase-9. The transcriptional level of
caspase-3， caspase-9， forkhead box O3a （FoxO3a） and B cell lymphoma 2 interacting mediator of cell death （Bim） mRNA were
detected by real-time quantitative polymerase chain reaction （qRT-PCR）. The protein expression of phosphorylated FoxO3a （p-
FoxO3a） and phosphorylated Akt （p-Akt） were detected by
Δ 基金项目 黑龙江省中医药管理局科技计划项目（No.ZHY2020- Western blot method. The nuclear translocation of FoxO3a
179）；齐齐哈尔市科技计划联合引导项目（No.LHYD-202028）
protein was detected by immunostaining combined with laser
＊第一作者 副研究员，博士。研究方向：天然药物抗肿瘤。E-
mail：maliwei@qmu.edu.cn confocal microscopy. RESULTS 10 μmol/L DP and 10 μmol/L
# 通信作者 教授，博士生导师，博士。研究方向：天然药物抗肿 DP+LY294002 could inhibit the proliferation and induce the
瘤。E-mail：jcliu@qmu.edu.cn apoptosis of HL60 cells （P＜0.01）. After treatment of 5， 10，

中国药房 2023年第34卷第7期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 7 · 825 ·