Page 67 - 《中国药房》2023年7期

AO

EB

Merge

A.空白对照组 B. DP 5 μmol/L组 C. DP 10 μmol/L组 D. DP 20 μmol/L组
图3 各组细胞形态学变化检测的荧光显微图（AO-EB染色）
表3 各组细胞的 LDH 释放量和 caspase-3、caspase-9 表5 各组细胞中 p-FoxO3a、p-Akt 蛋白表达水平测定
活性测定结果（x±s，n＝3） 结果（x±s，n＝3）
组别 LDH释放量/（U/L） caspase-3活性 caspase-9活性 组别 p-FoxO3a/GAPDH p-Akt/GAPDH
空白对照组 112.697±10.870 5.393±1.258 5.627±1.567 空白对照组 1.060±0.086 0.959±0.062
DP 5 μmol/L组 155.220±8.223 a 12.760±1.763 a 10.640±1.474 b DP 10 μmol/L组 0.572±0.045 a 0.733±0.061 b
DP 10 μmol/L组 217.367±16.294 a 26.553±2.483 a 19.023±1.980 a LY294002组 0.970±0.111 0.901±0.057
DP 20 μmol/L组 238.191±14.972 a 34.601±2.382 a 24.090±1.412 a DP 10 μmol/L+LY294002组 0.401±0.039 a 0.479±0.051 a
a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与空白对照组比较，P＜0.05 a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与空白对照组比较，P＜0.05
表4 各 组 细 胞 中 caspase-3、caspase-9、Bim、FoxO3a 空白对照组和LY294002组细胞胞质内的红色荧光相对
mRNA转录水平测定结果（x±s，n＝3） 较明显，而 DP 10 μmol/L+LY294002 组细胞核染色区域
组别 caspase-3/β-actin caspase-9/β-actin Bim/β-actin FoxO3a/β-actin 内的红色荧光较强，显示出较明显的核转位变化。结果
空白对照组 1.000 1.000 1.000 1.000
DP 10 μmol/L组 3.454±0.400 a 2.864±0.436 b 2.718±0.431 b 0.731±0.046 a 见图5。
LY294002组 2.634±0.316 b 2.547±0.282 b 2.492±0.324 b 0.803±0.037 b 4 讨论
DP 10 μmol/L+LY294002组 5.404±0.457 a 4.593±0.439 a 4.030±0.433 a 0.526±0.040 a
本研究中，笔者分别采用 MTT 法和 ELISA 法检测
a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与空白对照组比较，P＜0.05
了 DP 对 HL60 细胞的增殖抑制能力及细胞培养液中
p-Akt 60 kDa
LDH的释放量，通过AO-EB和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色
p-FoxO3a 85 kDa 法观察并测定了细胞形态学变化及细胞凋亡率，进一步
证实了DP能抑制HL60细胞增殖并诱导其凋亡，这与前
GAPDH 37 kDa [7]
A.空白对 B. DP 10 C. LY294002 D. DP 10 期研究结果一致 。
照组 μmol/L组 组 μmol/L+
LY294002组 另外，鉴于PI3K/Akt信号通路与白血病发生发展的
图4 各组细胞中p-FoxO3a、p-Akt蛋白表达的电泳图 关系密切 ，而LY294002作为PI3K的特异性抑制剂，又
[5]
[8]
3.7 细胞中FoxO3a蛋白核转位观察结果 能够抑制包括 Akt 在内的下游效应物的激活 ，是研究
共聚焦显微镜下可见，表示 FoxO3a 蛋白的红色荧 与PI3K/Akt信号通路相关的分子机制中常用的抑制剂，
光在空白对照组细胞 DAPI 核染色区域内表达不明显， 因此，本研究结合LY294002来验证实验对象DP是否能

中国药房 2023年第34卷第7期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 7 · 829 ·