Page 55 - 《中国药房》2023年6期
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表1 10批HQD饮片的来源信息                          图。以黄芩苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间
                  黄芩         白芍        炙甘草         大枣        和相对峰面积，以考察供试品溶液稳定性。结果显示，
          编号
               产地    批号   产地   批号    产地   批号    产地   批号      各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 1%（n＝6），相对
          S1   内蒙古  21120803  安徽  21111910  内蒙古  21090302  山东  21082405
          S2   内蒙古  21120803  安徽  21101407  内蒙古  21111201  山东  21082405  峰面积的 RSD 均小于 3%（n＝6），表明供试品溶液于室
          S3   内蒙古  21120803  安徽  21082604  内蒙古  21122305  山东  21082405  温下放置24 h内稳定性良好。
          S4   山西   21123101  安徽  21111910  内蒙古  21090302  山东  21082405  2.2.5 HPLC 指纹图谱的建立 取 10 批 HQD 供试品溶
          S5   山西   21123101  安徽  21101407  内蒙古  21111201  山东  21082405
          S6   山西   21123101  安徽  21082604  内蒙古  21122305  山东  21082405  液，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，将图
          S7   山西   21111105  安徽  21111910  内蒙古  21090302  山东  21082405  谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012
          S8   山西   21111105  安徽  21101407  内蒙古  21111201  山东  21082405  版）》，以 S1 为参照图谱（峰数最多），采用中位数法，设
          S9   山西   21111105  安徽  21082604  内蒙古  21122305  山东  21082405
          S10  山西   21111105  安徽  21082604  内蒙古  21090302  山东  21082405  置时间窗宽度为0.1 min，经多点校正和Mark峰匹配后，
                                                             得到 10 批 HQD 的叠加指纹图谱和对照指纹图谱（R）。
          过；合并 2 次滤液，浓缩，制成每 1 mL 含 1 g 生药的
                                                             结果显示，10批HQD共有37个共有峰，详见图1。
          HQD，共制备 10 批（编号 S1～S10），于－20 ℃保存，
                                                             2.2.6 共有峰的指认 取“2.2.2”项下混合对照品溶液，
          备用。
                                                             按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图（图2），并
          2.2 HQD的指纹图谱建立
                                                             与对照指纹图谱进行比对，共指认10个共有峰，分别为
          2.2.1 色谱条件 以 Shim-pack GIS C18 （4.6 mm×250
                                                             芍药内酯苷（2号峰）、芍药苷（3号峰）、芹糖甘草苷（5号
          mm，5 μm）为色谱柱，乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B）为流
                                                             峰）、黄芩苷（14号峰）、千层纸素A苷（19号峰）、汉黄芩
          动 相 进 行 梯 度 洗 脱（0～13  min，17%A；13～25  min，
                                                             苷（22 号峰）、黄芩素（27 号峰）、甘草酸（28 号峰）、汉黄
          17%A→19%A；25～26  min，19%A→22%A；26～42
                                                             芩素（32号峰）、千层纸素A（34号峰）。
          min，22%A→24%A；42～43 min，24%A→28%A；43～53
                                                             2.2.7 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评
          min，28%A；53～65  min，28%A→85%A；65～80  min，
                                                             价系统（2012 版）》对 10 批 HQD 的指纹图谱进行相似度
          85%A→17%A）；流速为1 mL/min；柱温为40 ℃；检测波
                                                             评价。结果显示，10 批 HQD 指纹图谱与对照指纹图谱
          长为276 nm；进样量为10 μL。
          2.2.2 混合对照品溶液的制备 取黄芩苷、黄芩素、汉                        的相似度均大于 0.99，表明 10 批样品的质量差异较小，
          黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A、千层纸素A苷、芍药苷、                         化学成分组成一致性较好。
          芍药内酯苷、甘草酸、芹糖甘草苷对照品适量，精密称                           2.3 不同相态HQD的表征
          定，加甲醇溶解，制成上述各成分质量浓度分别为 13、                         2.3.1 相态拆分 （1）按“2.1”项下方法制备HQD（编号
          15、17、3.4、6.9、21.4、54、64、40、20 μg/mL的混合对照品         S1）。取上述 HQD 样品适量，以 13 000 r/min 离心 30
          溶液。                                                min，取沉淀，即得 HQD 沉淀相态（precipitation phase，
          2.2.3 供试品溶液的制备 精密移取“2.1”项下 HQD 1                   P）。（2）取上清液，经0.45 μm微孔滤膜抽滤后，将滤液加
          mL，置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇超声（功率 300 W，频                  至透析袋（每次 5 mL，共 40 mL）中，随即将透析袋装入
          率 40 kHz，下同）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取 1                     加有水200 mL的烧杯中，于25 ℃下以500 r/min磁力搅
          mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，经                       拌30 min；取出透析袋中的样品，以13 000 r/min离心30
          0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。                                  min。上述透析-离心操作重复2次，收集烧杯中液体，即
          2.2.4 方法学考察 （1）取“2.2.3”项下供试品溶液（编                   得 HQD 真溶液相态（solution phase，S）。（3）透析袋中的
          号S1），按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录                     样品即为 HQD 纳米相态（nano phase，N）。取 HQD、
          色谱图。以黄芩苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留                           HQD-P、HQD-S、HQD-N，真空冷冻干燥 24 h，得相应冻
          时间和相对峰面积，以考察方法精密度。结果显示，各                           干粉，质量分别为（20.34±1.72）、（1.67±0.09）、（2.15±
          共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 1%（n＝6），相对峰                     0.17）、（15.93±1.11）g，HQD-P、HQD-S、HQD-N 在 HQD
          面积的 RSD 均小于 3%（n＝6），表明方法精密度良好。                     中的质量占比分别为 8.21%、10.59%、78.33%。按上述
         （2）按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液（编号 S1），共 6                   方法制备HQD不同相态冻干粉3批，保存，备用。
          份，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以                       2.3.2 相态表征 （1）取 HQD-P、HQD-S、HQD-N 冻干
          黄芩苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对                           粉适量，加水复溶后，采用激光粒度（分析）仪测定粒径
          峰面积，以考察方法重复性。结果显示，各共有峰相对                           和 Zeta 电位。结果显示，HQD-P 中 10% 粒子的粒径
          保留时间的 RSD 均小于 1%（n＝6），相对峰面积的 RSD                  （D0.1 ）为（4.670±0.051）μm、50% 粒 子 的 粒 径（D0.5 ）为
          均小于 3%（n＝6），表明方法重复性好。（3）取“2.2.3”项                 （20.939±0.091）μm、90% 粒子的粒径（D0.9 ）为（91.522±
          下供试品溶液（编号 S1），分别于室温下放置 0、2、4、8、                    0.530）μm；以（D0.9－D0.1 ）/D0.5计算得到 HQD-P 的粒径分
          12、24 h 时按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱                   布宽度为 4.148±0.018（分布宽度越接近 1，表示粒子分


          中国药房  2023年第34卷第6期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 6    · 689 ·
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