Page 60 - 《中国药房》2023年6期

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）属于炎性肠病 1.3 实验动物
中的一种慢性肠道炎症性疾病，其发生与环境、基因易 40 只 SPF 级雄性 SD 大鼠的体质量为（180±20）g，
感、肠道微生物等因素相关。火麻仁为桑科植物大麻 购自北京华阜康生物科技股份有限公司，动物生产合格
Cannabis sativa L. 的干燥成熟果实，火麻仁油为其油脂 证号为 SCXK（京）2019-0008。所有动物均饲养于广东
提取物，具有调节肠道菌群、润肠通便、减轻肠道炎症等 药科大学SPF级实验动物中心动物房[每天光照12 h，相
活性 [1―3] 。 对湿度 45%～55%，温度（22±2）℃]，自由摄食、饮水。
肠道菌群和微生物代谢产物对于肠道健康的维持 本研究方案遵循广东药科大学实验动物管理和使用的
十分重要，肠道菌群的改变可不同程度地影响宿主与肠 相关规定，动物伦理审查批号为gdpulac2022009。
道菌群间的共生关系。基于多数中药和中药有效成分 2 方法
可通过调节肠道菌群来治疗UC [4―6] ，以及火麻仁油可调 2.1 分组与给药
节肠道菌群、减轻肠道炎症的前期研究，本文拟采用 所有大鼠适应性饲养1周后，随机分为对照组、模型
16S rRNA高通量测序技术，研究火麻仁油干预前后UC 组、火麻仁油组（1 g/kg，0.5%聚山梨酯80溶解）、柳氮磺
模型大鼠肠道菌群结构及组成的变化，并鉴定丰度存在 胺吡啶组（阳性对照，300 mg/kg），每组 10 只，剂量参照
显著差异的菌属，从肠道微生态角度初步阐述火麻仁油 人用剂量折算并结合相关文献 确定。对照组和模型组
[7]
改善 UC 的潜在机制，为火麻仁油防治胃肠道疾病的临
大鼠灌胃 0.5% 聚山梨酯 80，火麻仁油组和柳氮磺胺吡
床应用提供实验依据。
啶组大鼠按上述剂量灌胃相应药液，每天 1 次，连续 10
1 材料 d。从第4天开始，模型组、火麻仁油组和柳氮磺胺吡啶
1.1 主要仪器 组大鼠连续7 d饮用4%DSS溶液以建立UC模型 。
[8]
本研究所用主要仪器有 HiSeq 2500 型高通量测序
2.2 大鼠疾病活动指数评分
仪（美国 Illumina 公司）、9902 型聚合酶链式反应（PCR）
末次给药后，观察并记录各组大鼠的体质量、粪便
扩增仪（美国ABI公司）、ELx800型酶标仪（美国BioTek
性状和隐血、便血情况。参考UC疾病活动指数（disease
公司）、BX51型光学显微镜（日本Olympus公司）、Centri‐ [4]
activity index，DAI）标准（表 1）进行评分 ，DAI 评分＝
fuge 5424型低温离心机（德国Eppendorf公司）等。
（体质量下降分数+大便性状分数+隐血/便血分数）/3。体
1.2 主要药品与试剂
质量下降百分比按四舍五入的原则计分。
火麻仁油（批号20210104，脂肪酸含量为45%，其中
表1 DAI评分标准表
不饱和脂肪酸占 89.42%，多不饱和脂肪酸占 75.23%，
分值 体质量下降百分比/% 大便性状 隐血/便血
ω-6脂肪酸和ω-3脂肪酸的质量比为3.65∶1）购自广西巴 0 ＜1 正常 隐血实验阴性（－）
马印象生活体验产业有限公司；右旋葡聚糖硫酸钠（dex‐ 1 1～5 软便且成型 隐血实验阳性（+）
2 6～10 软便伴有稀便 隐血实验阳性（++）
tran sodium sulfate，DSS，批号C11951405）购自上海麦克
3 11～15 稀便 隐血实验阳性（+++）
林生化科技股份有限公司；柳氮磺胺吡啶片（批号 4 ＞15 严重稀便 肉眼便血
22200301，规格0.25 g/片）购自上海福达制药有限公司； －：隐血试验阴性；+：隐血试验显浅蓝色；++：隐血试验显蓝色；
隐血试剂盒（批号 20210302）购自南京建成生物工程研 +++：隐血试验显深蓝色
究所；肿瘤坏死因子α（tumour necrosis factor-α，TNF-α） 2.3 大鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-10含量的测定
酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号B262380）购自 末次给药后，大鼠以腹腔注射异氟烷麻醉，于眼眶
美国 BioLegend 公司；白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6） 取血后离心（4 ℃，3 000 r/min）10 min，取上层血清，采用
ELISA 试剂盒（批号 M210316-004a）和 IL-10 ELISA 试 ELISA 法以酶标仪检测其血清中 TNF-α、IL-6、IL-10 含
剂盒（批号 M210316-003a）均购自深圳欣博盛生物科技 量。严格按照试剂盒说明书操作。
有限公司；无水苏木精（批号20210529）购自国药集团化 2.4 大鼠结肠长度、结肠质量、结肠单位长度质量的测
学试剂有限公司；伊红染液（批号CR2205132）购自武汉 定及结肠组织的病理学观察
赛维尔生物科技有限公司；异氟烷（批号 S200106）购自 取血后，大鼠以腹腔注射 3% 戊巴比妥钠深度麻醉
上海玉研科学仪器有限公司；基因组 DNA 提取试剂盒 后处死，分离结肠组织，用预冷的磷酸盐缓冲液灌注冲
（批号 12888-100）购自美国 MO Bio Laboratories 公司； 洗内容物，用滤纸吸干后，测定其结肠长度、结肠质量，
Q5超保真DNA聚合酶（批号M0491L）、dNTP Mix（批号 并计算结肠单位长度质量：结肠单位长度质量＝结肠质
R0191）均购自美国 NEB 公司；MinElute PCR 纯化试剂 量/结肠长度。剪取大鼠结肠组织2 cm，置于4%多聚甲
TM
盒（批号 28006）购自德国 Qiagen 公司；VAHTS DNA 醛中固定24 h，经脱水、浸蜡包埋、切片、脱蜡后，以苏木
Clean Beads（批号 N411-011）购自南京诺唯赞生物科技 精-伊红（HE）染色并使用光学显微镜进行组织病理学
有限公司；其余试剂均为分析纯，水为双蒸水。 观察。

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