Page 40 - 《中国药房》2023年5期

2.2 长梗金腰中CA和CI的提取工艺优化 的提取有显著影响（P＜0.01），但其 A2 （50% 乙醇）与 A3
2.2.1 长梗金腰提取物的制备及 CA 和 CI 的总转移率 （90%乙醇）水平的K值非常接近，从提取成本的角度考
测定 称取长梗金腰药材粉末 1.0 g（过三号筛），置于 虑，本研究选择 50% 乙醇为提取溶剂。因素 B、C、D 对
150 mL具塞锥形瓶中，分别加入相应体积分数的乙醇溶 CA和CI的提取无显著影响，综合降低能耗、简化提取程
液，密塞，静置12 h；于相应温度下超声（频率40 kHz，功 序、节约溶剂的考虑分别选择室温、提取 1 次及料液比
率 250 W，下同）提取 45 min，过滤，滤液于 40 ℃条件下 1∶8 作为提取参数。因此，最终确定最优提取工艺为
减压回收乙醇，得浸膏状提取物。将所得浸膏状提取物 A2B1C1D1，即将长梗金腰药材粉末以 8 倍量的 50% 乙醇
置于－20 ℃条件下冷冻 2 h，再置于冷冻真空干燥机中 在室温下一次性超声提取45 min。
干燥，即得固态提取物。取固态提取物约 0.1 g，精密称 2.2.3 最优提取工艺的验证 按照“2.2.2”项下最优提
定，置于50 mL烧杯中，精密加入10 mL甲醇，超声使其 取工艺条件提取长梗金腰中的 CA 和 CI，平行 3 次。结
充分溶解；取上清液过0.22 μm微孔滤膜，滤液按“2.1.3” 果显示，长梗金腰中CA和CI的平均总转移率为95.43%，
RSD为1.02%（n＝3）；平均总含量为25.55 mg/g，RSD为
项下色谱条件进样分析，根据标准曲线计算CA和CI的
1.13%（n＝3）。这表明该工艺合理、稳定、可行。
含量，再计算 CA 和 CI 的转移率（转移率＝固态提取物
2.3 长梗金腰中CA和CI的富集工艺优化
中目标成分含量×提取物得率/生药材中目标成分含
笔者前期预实验考察了 HP-20、HPD-500、D101 型
量×100%）。
号大孔吸附树脂对长梗金腰中 CA 和 CI 总饱和吸附和
4
2.2.2 正交实验 采用 L9 （3）正交实验对长梗金腰中
洗脱的影响，结果发现，3种大孔吸附树脂对CA和CI的
CA 和 CI 的提取工艺进行优化。以乙醇体积分数（A）、
吸附效果均较好；但在洗脱过程中，相较于HP-20、HPD-
浸提温度（B）、浸提次数（C）及料液比（D）为考察因素，
500 型大孔吸附树脂，D101 型大孔吸附树脂吸附的 CA
4
以 CA 和 CI 的总转移率为评价指标，根据 L9 （3）正交表
和 CI 更易洗脱。因此，本研究笔者采用 D101 型大孔吸
设计实验，然后按“2.2.1”项下方法进行提取，计算CA和
附树脂来富集长梗金腰中的CA和CI。由于柱层析过程
CI 的总转移率。正交实验的因素与水平见表 2，正交实
中洗脱参数对CA和CI的富集具有重要的影响，因此笔
验设计及结果见表3，方差分析结果见表4。
者考察了杂质和目标成分的洗脱剂体积分数及用量对
表2 正交实验的因素与水平 长梗金腰中CA和CI富集工艺的影响。
水平 A /% B /ºC C /次 D/（g/mL） 2.3.1 长梗金腰提取物的制备 取 300.0 g 长梗金腰按
1 10 20 1 1∶8 “2.2.2”项下的最优提取工艺提取长梗金腰中的 CA 和
2 50 30 2 1∶10
3 90 40 3 1∶15 CI，得固态提取物，于4 ℃条件下保存备用。
表3 正交实验设计及结果 2.3.2 上柱样品溶液的制备 取 1.0 g 长梗金腰固态提
取物置于50 mL烧杯中，加入20倍量蒸馏水，搅拌均匀，
试验号 A B C D CA转移率/% CI转移率/% CA和CI的总转移率/%
1 1 1 1 1 14.94 6.43 21.37 超声处理 10 min，过滤，即得质量浓度为 50.0 mg/mL 的
2 1 2 2 2 28.21 11.91 40.12 样品溶液（以提取物计）。
3 1 3 3 3 17.83 7.21 25.03 2.3.3 洗脱剂体积分数的考察 称取 1 份处理好的
4 2 1 2 3 61.63 34.63 96.26
5 2 2 3 1 57.15 32.14 89.29 D101 型大孔吸附树脂 66.0 g，湿法装柱，装入 3 cm×35
6 2 3 1 2 60.34 34.08 94.42 cm 的层析柱中[1 柱床体积（BV）＝75 mL]。将 100 mL
7 3 1 3 2 58.22 33.27 91.50 的样品溶液以 2 BV/h 的流速上柱，静置 1 h，再依次用
8 3 2 1 3 68.68 38.58 107.27 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80% 和 90% 乙醇
9 3 3 2 1 54.24 30.96 85.20
86.52 209.13 223.06 195.86 各洗脱 4 BV，分别收集各段洗脱流分，采用 HPLC 法测
K 1
279.97 236.68 221.58 226.04 定各样品洗脱流分中 CA 和 CI 的含量，并记录色谱图。
K 2
283.97 204.65 205.82 228.56
K 3 结果如图 2 所示，当乙醇体积分数＜50% 时，洗脱流分
R 197.45 32.03 17.24 32.70
中 CA 和 CI 的总量（以 mg 计，下同）随着乙醇体积分数
表4 方差分析结果
的升高而增大，且10%、20%乙醇洗脱流分中CA和CI的
方差来源 离差平方和 自由度 F P 总量甚微；当乙醇体积分数＞50%时，洗脱流分中CA和
A 8 491.71 2 139.51 ＜0.01 CI的总量呈下降趋势，且80%、90%乙醇洗脱流分中CA
B 200.55 2 3.29 ＞0.05
C（误差） 60.87 2 1.00 ＞0.05 和CI的总量甚微。由此可知，50%乙醇可最大限度地将
D 220.72 2 3.63 ＞0.05 CA和CI解吸完全，故确定50%乙醇为CA和CI洗脱剂。
注：F 0.05 （2，2）＝19.00，F 0.01 （2，2）＝99.00 20%乙醇洗脱流分中CA和CI的总量小，可将大部分极性
由表 4 可知，影响长梗金腰中 CA 和 CI 的总转移率 较大的杂质洗脱下来，故确定20%乙醇为杂质洗脱剂。
的显著程度依次为 A＞D＞B＞C，即乙醇体积分数＞料 2.3.4 杂质洗脱剂用量的考察 称取 3 份 D101 型大孔
液比＞浸提温度＞浸提次数。其中，因素 A 对 CA 和 CI 吸附树脂，每份66.0 g，湿法装柱，分别装入3 cm×35 cm

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