Page 43 - 《中国药房》2023年5期

significance in the difference of cell viability. Compared with normal control group， the contents of NO， TNF-α， IL-1β and IL-6，
mRNA expressions of TLR4 and NF-κB， and protein expressions of NOS and COX-2 were increased significantly in LPS group
（P＜0.05）. Compared with 4% or 15% blank serum groups， the levels of above indexes were increased significantly in 4% or 15%
blank serum+LPS groups （P＜0.05）. Compared with LPS group， the levels of above indexes were decreased significantly in S.
involucratus ethanol extract groups （P＜0.05）. Compared with 4% or 15% blank serum+LPS groups， the levels of above indexes
were decreased significantly in 4% or 15% drug-containing serum+LPS groups （P＜0.05）. CONCLUSIONS The ethanol extract
and the drug-containing serum of S. involucratus can significantly alleviate LPS-induced inflammatory reaction， the mechanism of
which may be associated with inhibiting the activity of TLR4/NF-κB signaling pathway， down-regulating the protein expressions of
COX-2 and NOS， and reducing the release of inflammatory factors.
KEYWORDS Stahlianthus involucratu； TLR4/NF-κB signaling pathway； inflammatory factors； macrophage

三七姜是姜科姜七属植物姜三七Stahlianthus invo‐ 莱克景达实验动物有限公司，动物生产许可证号为
lucratus （King ex Bak.） Craib.的块根和根茎，收录于《广 SCXK（湘）2019-0004。大鼠在 20～25 ℃的实验室环境
西壮族自治区壮药质量标准》（第二卷），其别名为小田 中适应性喂养1周。本动物实验方案经广西中医药大学
[1]
七、竹田七、姜三七等 ，是广西民族民间药，既可用于跌 伦理委员会批准（批准号为DW20220108-025）。
打损伤、风湿骨痛、吐血衄血、月经过多，还能外用治虫 1.3 主要仪器
[2]
蛇咬伤、外伤出血 。本课题组前期研究发现，三七姜醇 本研究所用主要仪器有 HR40-ⅡB2 型生物安全柜
提物可以明显抑制二甲苯所致的小鼠耳郭肿胀、醋酸引 （青岛海尔生物科技有限公司），MCO-18AIC型CO2细胞
起的小鼠毛细血管通透性增加和小鼠棉球肉芽肿增 培养箱（日本 SAYO 公司），DMI3000B 型倒置荧光显微
[3]
生 。进一步研究发现，原儿茶酸、对羟基苯甲酸、对羟 镜（德国 Leica 公司），Epoch 型全波长酶标仪（美国 Bio-
[4]
基苯甲醛可能是三七姜发挥抗炎的物质基础 。但其具 Tek 公司），1780 型紫外分光光度计（日本 Shimadzu 公
体抗炎作用机制尚不明确。 司），Sorvall ST 16R 型高速冷冻离心机（美国 Thermo
Toll 样受体（Toll-like receptors，TLRs）是天然免疫 Fisher Scientific公司），LightCycler96型实时荧光定量聚
系统中一类保守的模式识别受体，在外界病原体刺激下 合酶链式反应（PCR）仪（瑞士Roche公司），BIO-RADXR
可激活下游炎症信号通路 。TLR4是TLRs家族中的重 型凝胶成像仪、Power Pac Universal型电泳仪（美国Bio-
[5]
要成员，在炎症反应发生过程中具有重要作用，核因子 Rad公司）等。
κB（nuclear factor-κB，NF-κB）作为 TLR4 信号通路的下 1.4 主要药品与试剂
游效应因子，在病理条件下，TLR4 激活会导致细胞内 三七姜药材于2020年3月采自广西南宁武鸣区，经
NF-κB 信号转导并产生炎症细胞因子而引发炎症反 广西中医药大学药学院滕建北教授鉴定为姜科姜七属
[6]
应 。但三七姜是否可通过 TLR4/NF-κB 信号通路发挥 植物姜三七S. involucratus （King ex Bak.） Craib.的块根
抗炎作用，尚不明确。 和根茎；药材洗净后，进行烘干、粉碎处理，然后密封置
三七姜所含化学成分多样，其口服给药后，理论上 于干燥阴凉处保存备用。LPS（批号 L4391）购自美国
可被吸收入血，进而在人体内循环抵达靶点，当达到一 Sigma公司；DMEM高糖培养基（批号C11995500BT）购
[7]
定浓度时可产生相应药理作用 。基于此，本研究先将 自美国Gibco公司；胎牛血清（批号04-001-1A）购自美国
三七姜灌胃给予大鼠，再取其血清；采用脂多糖（lipo‐ BI公司；CCK-8试剂盒（批号C0040）购自上海碧云天生物
polysaccharide，LPS）刺激巨噬细胞 RAW264.7，建立体 技术有限公司；一氧化氮（nitric oxide，NO）、肿瘤坏死因子
外炎症细胞模型，进而考察三七姜醇提物和含药血清对 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素 6（inter‐
RAW264.7 细胞的炎症因子释放及 TLR4/NF-κB 信号通 leukin-6，IL-6）、IL-1β 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测
路的影响，初步探索和完善三七姜的抗炎作用机制。 试剂盒（批号分别为 210308N3、210308T2、210308I2、
1 材料 210308I6）购自江苏晶美生物科技有限公司；RIPA 裂解
1.1 细胞株 液（批号R0020）购自北京索来宝科技有限公司；兔源环
小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7购于中国科学院上海 氧化酶 2（cyclooxygenase 2，COX2）多克隆抗体（批号
生科院细胞资源中心。 BS10411R）购自北京博奥森生物技术有限公司；兔源一
1.2 实验动物 氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）多克隆抗体（批
本研究所用动物为 SPF 级 Waster 大鼠，雄性（性别 号 AF0199）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-
对本研究无影响），体质量（200±10） g，购自湖南斯莱克 phosphate dehydrogenase ，GAPDH）抗体（批号 AF7018）

中国药房 2023年第34卷第5期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 5 · 549 ·