Page 39 - 《中国药房》2023年5期
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丛间或石隙。据《中国藏药植物资源考订》记载，长梗金                          95%B）；流速为 0.8 mL/min；柱温为 35 ℃；检测波长为
          腰为特色藏药“亚吉玛”的基原植物之一 。长梗金腰以                          254 nm；进样量为10 µL。
                                            [1]
                                               [2]
          干燥全草入药，其味苦性凉，清胆热，祛胆病 ，用于治疗                         2.1.4 专属性考察 取“2.1.1”“2.1.2”项下供试品溶液
          胆病引起的发烧头痛、胆囊疾患、急性黄疸型肝炎等                            和混合对照品溶液适量，按“2.1.3”项下色谱条件进行分
            [3]
          症 。本课题组前期研究采用肝内胆汁淤积 （intrahe‐                      析，记录色谱图。结果显示，供试品溶液和混合对照品
          patic cholestasis，IC）模型小鼠验证了长梗金腰抗IC的功              溶液图谱中CA和CI的保留时间一致，且分离度均大于
          效，并从中分离得到了2个高度甲氧基化的黄酮醇衍生                           1.5。结果见图 1。
          物 ——chrysosplenoside  A（CA）和 chrysosplenoside  I                     CA
                                                                 1.0                 CI
              [4]
         （CI） ；并发现这 2 种成分对 IC 模型小鼠的肝损伤具有                         0.8
                                                                 0.6                                 供试品溶液
          保护作用，且优于熊去氧胆酸（目前临床治疗IC的一线                             AU  0.4
          药物）。由此可见，CA、CI 作为抗 IC 药物具有良好的开                         0.2                               混合对照品溶液
                                                                  0
          发前景。基于此，本研究初探长梗金腰中CA、CI的提取富                             0                                                      5                                                                                             10                                                                                       15                                                                                        20                 25                30               35
                                                                                     t/min
          集工艺，以期为CA、CI的药物开发提供物质基础。
                                                                图1 供试品溶液和混合对照品溶液的HPLC图
          1 材料
          1.1 主要仪器                                           2.1.5 线性关系考察 取“2.1.2”项下制备的混合对照
              本研究所用主要仪器有 EX1600 型高效液相色谱                      品溶液适量，置于 10 mL 容量瓶中，用甲醇分别稀释 2、
         （HPLC）仪（上海伍丰科学仪器有限公司）、CP-214 型电                     4、8、16、32、64倍后得到系列对照品溶液；按“2.1.3”项下
          子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）、KQ-5200DB型超声                      色谱条件进样分析，记录色谱图。以进样量（µg）为横坐
          波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）、BT25S型                        标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得 CA 和 CI
          电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）、                            的回归方程；再以信噪比10∶1、3∶1分别计算定量限和检
          GOLD-SIM型冷冻干燥机（美国Siemon公司）、R-210型                  测限。结果见表1。
          旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）。                                      表1 CA和CI的线性关系及灵敏度考察结果
          1.2 药品与试剂                                           成分     回归方程      R 2    线性范围/µg   检测限/µg  定量限/µg
                                                              CA   Y＝3 299.6X+133.99  0.999 9  0.065 6～4.200 0  0.000 8  0.002 3
              长梗金腰药材于 2018 年 7 月采集自四川省壤塘县
                                                              CI   Y＝4 387.5X+148.26  0.999 9  0.056 3～3.600 0  0.000 7  0.002 0
          中壤塘乡，经江西中医药大学中药资源与民族药研究中
                                                             2.1.6 精密度试验 取同一供试品溶液适量，按“2.1.3”
          心钟国跃研究员鉴定为长梗金腰 C. axillare Maxim. 全
                                                             项下色谱条件重复测定 6 次，分别记录峰面积，计算得
          草。CA、CI标准品为本实验室自制，纯度经HPLC检测
                                                             CA 和 CI 峰面积的 RSD 分别为 0.09%、1.36%（n＝6），表
          均大于 98%。HPD-500 型和 D101 型大孔吸附树脂购自
                                                             明仪器精密度良好。
          沧州宝恩化工有限公司；Diaion HP-20 型大孔吸附树脂
                                                             2.1.7 稳定性试验 取同一供试品溶液适量，分别于制
          购自日本三菱化学公司；色谱级乙腈购自德国Merck公
                                                             备后0、2、4、8、12、24 h时按“2.1.3”项下色谱条件进样分
          司；质谱级乙酸购自上海阿拉丁生化科技股份有限公
                                                             析，记录峰面积，计算得到 CA 和 CI 峰面积的 RSD 分别
          司；其余试剂为实验室常用规格。                                    为 0.52%、0.82%（n＝6），表明供试品溶液在制备后 24 h
          2 方法与结果                                            内稳定性良好。
          2.1 CA和CI含量测定方法的建立                                 2.1.8 重复性试验 精密称取长梗金腰药材粉末约0.5 g，
          2.1.1 供试品溶液的制备 取干燥长梗金腰全草适量，                        共6份，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.3”
          粉碎过三号筛，取 0.5 g 粉末，精密称定，置于 150 mL 具                 项下色谱条件进行分析，记录峰面积，并根据标准曲线
          塞锥形瓶中，精密加入 25 mL 50% 甲醇，密塞，称定质                     分别计算CA和CI含量。结果显示，CA和CI含量的RSD
          量；超声（功率 250 W，频率 40 kHz）处理 45 min，取出放              分别为1.62%、1.04%（n＝6），表明该方法重复性良好。
          冷，称定质量；以 50% 甲醇补足减失的质量，摇匀，过                        2.1.9 加样回收率试验 分别取 CA、CI 适量，精密称
          0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，备用。                               定，置于10 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，制成CA、CI质
          2.1.2 混合对照品溶液的制备 取CA、CI对照品适量，                      量浓度分别为1.60、0.90 mg/mL的混合对照品溶液。精
          精密称定，加入甲醇制成质量浓度分别为0.420 0、0.360 0                  密称取适量已知含量的长梗金腰样品约 0.25 g，平行 6
          mg/mL的混合对照品溶液，备用。                                  份，加入混合对照品溶液1 mL（相当于药材原有含量的
          2.1.3 色谱条件 色谱柱为 Inertsil ODS-2（250 mm×             100%）；按“2.1.1”项 下 方 法 制 备 供 试 品 溶 液 ，再 按
          4.6 mm，5 µm）；流动相为 0.1% 乙酸溶液（A）-乙腈（B）， “2.1.3”项下色谱条件进样分析，计算加样回收率。结果
          梯度洗脱（0～10 min，10%B→20%B；10～20 min，20%B→            显 示 ，CA、CI 的 平 均 加 样 回 收 率 分 别 为 95.96%、
          25%B；20～40 min，25%B→40%B；40～50 min，40%B→           102.63%，RSD 分别为 1.88%、2.98%（n＝6），表明该方法
          50%B；50～60 min，50%B→80%B；60～70 min，80%B→           准确性良好。


          中国药房  2023年第34卷第5期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 5    · 545 ·
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