Page 88 - 《中国药房》2023年3期
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scores  of  HE  staining  and  Masson  staining  were  significantly  increased （P＜0.01）.  The  protein  expressions  of  α-SMA，  Collagen
          Ⅰ， p-ERK1/2 and TGF-β1 in lung tissue were up-regulated significantly （P＜0.01）. Compared with model group， above indexes of
          mice  were  improved  significantly  in  linarin  high-dose  group （P＜0.05  or  P＜0.01），  and  most  of  indexes （except  for  lung  index）
          were  improved  significantly  in  linarin  low-dose  group （P＜0.05  or  P＜0.01）.  In  vitro，  compared  with  blank  group，  the  density  of
          cells in the model group increased， and obvious proliferation and other changes occurred； protein expressions of α-SMA， Collagen
          Ⅰ  and  p-ERK1/2  were  significantly  up-regulated （P＜0.05  or  P＜0.01）.  Compared  with  model  group，  the  cell  density  of  each
          concentration  group  was  decreased  and  the  morphology  gradually  returned  to  normal；  the  expressions  of  above  proteins  in  linarin
          high-concentration  group  and  the  protein  expression  of  p-ERK1/2  in  linarin  medium-concentration  group  were  down-regulated
          significantly（P＜0.05  or  P＜0.01）.  CONCLUSIONS  Linarin  may  regulate  ERK  and  inflammatory  pathways  to  reduce  the
          inflammatory response， thereby exerting anti-pulmonary fibrosis effect.
          KEYWORDS     linarin； pulmonary fibrosis； extracellular signal-regulated kinase pathway； inflammatory pathway



              特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）      ECLIPSE TI2-A 型倒置荧光显微镜（日本 Nikon 公司）；
          是一种进行性、致命性的疾病，主要表现为细胞外基质                            2-16R 型低温高速离心机（湖南恒诺仪器设备有限公
         （extracellular matrix，ECM）沉积、肺间质纤维瘢痕化和               司）；MCO-18AICUUV 型 CO2细胞培养箱（日本 PHCbi
                  [1]
          肺部重塑 。近年来，IPF 发病率呈持续上升趋势，且随                         公司）；ChemiDoc MP 型化学发光成像系统（美国 Bio-
                          [2]
          年龄的增加而升高 。中医将IPF归为“肺痿”和“肺痹”，                        Rad公司）。
                                             [3]
          其治法为益气养阴、清热解毒、活血化瘀 。研究表明，                           1.2 主要药品与试剂
          诸多中药成分（如黄芩素、雷公藤内酯、芍药苷等）都显                               本研究所用的主要药品与试剂有蒙花苷对照品（四
          现出了较好的 IPF 治疗效果         [4―7] 。以中医药理论和传统            川萃益润生物科技有限公司，批号 CYR-M0074210415，
          用法为线索，从中药成分中开发治疗 IPF 新药的前体化                         纯度98.5%），注射用盐酸博莱霉素（日本化药株式会社，
          合物具有重要价值。                                           批号 Y00720，规格 15 mg/瓶），吡非尼酮胶囊（北京康蒂
              黑面神 Breynia fruticosa（Linn.）Hook.f 为大戟科黑        尼药业股份有限公司，批号20211105，规格100 mg/颗），
          面神属植物，以干燥嫩枝叶及根入药，其性凉，微苦，归                           TGF-β 1 （美国 Peprotech 公司，批号 1020209），HFL1 细
                    [8]
          心、肝、肺经 。黑面神具有抗炎、抗病毒和免疫抑制等                           胞专用培养基（武汉普诺赛生命科技有限公司），兔源α-
                  [9]
          药理作用 ，由其组成的相关制剂可用于治疗慢性支气                            平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin，α-SMA）、Ⅰ
              [10]
          管炎 。本课题组前期从黑面神提取物中分离出了多                             型胶原蛋白（type Ⅰ collagen，Collagen Ⅰ）多克隆抗体和
          种化合物，并进行初步药效筛选后发现其中的蒙花苷具                            辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二
          有良好的抗肺纤维化药效。                                        抗（美 国 Cell  Signaling 公 司 ，批 号 分 别 为 8685T、
              据文献报道，蒙花苷具有抗炎镇痛、抗氧化、抗衰老                         72026T、7074P2），兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceral‐
                                                    [1]
                [11]
          等作用 ，而肺纤维化与炎症、氧化等有密切关联 。肺                           dehyde-3-phosphate  dehydrogenase，GAPDH）、ERK1/2、
          纤维化伴随着炎症发生和细胞因子释放。转化生长因                             磷酸化 ERK1/2（p-ERK1/2）抗体（美国 Affinity 公司，批
          子 β1 （transforming growth factor beta 1，TGF-β1 ）作为主  号分别为 AF7021、AF0155、AF1015），肿瘤坏死因子 α
          要致肺纤维化的细胞因子，可促进胶原蛋白产生，进而                           （tumor necrosis factor-α，TNF-α）和 TGF-β1酶联免疫吸
          导致纤维沉积 。TGF-β1致肺纤维化作用与其下游的                          附测定（ELISA）试剂盒（杭州联科生物技术股份有限公
                       [12]
          胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，     司，批号分别为 A28220233、A98111123），白细胞介素 6
          ERK）通路密切相关，在多种肺纤维化模型和病理组织                          （interleukin-6，IL-6）ELISA 试剂盒（江苏晶美生物科技
                                             [13]
          中均发现磷酸化 ERK（p-ERK）表达上调 。因此，本研                       有限公司，批号 202203），二氨基联苯胺（diaminobenzi‐
          究通过构建体内外肺纤维化模型，探讨蒙花苷对肺纤维                            dine，DAB）显色试剂盒（武汉塞维尔生物科技有限公
          化的改善作用，并基于炎症和ERK通路初步考察其作用                           司，货号G1212）；水为自制纯化水。
          机制，为抗IPF的新药研究提供实验基础。                                1.3 动物
          1 材料                                                    本研究所用动物为 SPF 级雄性 C57BL/6J 小鼠，共
          1.1 主要仪器                                            40只，8周龄，体质量（20±2） g，购自广东省医学实验动
              本研究所用的主要仪器有 HY-LWH03 型微量液体                      物中心，动物生产许可证号为 SCXK（粤）2022-0002，质
          气管内雾化装置（北京元森凯德生物技术有限公司）；                            量合格证号为 44007200100881。检疫合格后将其饲养
          MULTISKAN 型 酶 标 仪（美 国 PerkinElmer 公 司）；             于中山市中医院中药药理实验室动物房中（屏障环境），


          · 334 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 3                               中国药房  2023年第34卷第3期
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