Page 84 - 《中国药房》2023年3期

2.9 肝组织中PPARγ、NF-κB及p-AMPK蛋白表达检测 表1 各组大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比
采用Western blot法进行检测。取“2.4”项下肝组织 较（x±s，n＝10，mmol/L）
适量，剪碎并经裂解处理后，于 2～8 ℃条件下以 12 000 组别 TC TG HDL-C LDL-C
空白组 1.18±0.24 0.62±0.10 0.88±0.15 0.65±0.08
r/min离心12 min，吸取上层清液，通过BCA蛋白定量试
模型组 3.17±0.60 a 1.76±0.23 a 0.83±0.16 1.24±0.21 a
剂盒测定总蛋白含量。再取蛋白30 μg，行凝胶电泳（开 阳性对照组 2.24±0.41 b 1.26±0.17 b 0.93±0.17 0.95±0.19 b
始为80 V电泳，待蛋白分层后调为120 V，直至目的蛋白 余甘子水提物高剂量组 2.31±0.41 b 1.19±0.15 b 0.90±0.17 0.92±0.17 b
余甘子水提物中剂量组 2.57±0.51 b 1.49±0.23 b 0.89±0.15 1.04±0.19 b
分离），经220 mA转膜处理2 h，之后转移至硝酸纤维素
余甘子水提物低剂量组 3.16±0.63 1.80±0.31 0.86±0.16 1.21±0.22
酶膜上，以 5% 脱脂牛奶室温封闭处理 2 h，分别加入 F 23.127 45.068 0.458 14.523
PPARγ、NF-κB、AMPK、p-AMPK、β-actin一抗（内参β-actin P ＜0.001 ＜0.001 0.806 ＜0.001
稀释 5 000 倍，其他一抗稀释 1 000 倍），于 4 ℃孵育过 a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
夜；第2天以三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液清洗10 min， 表2 各组大鼠血清中FINS水平和IRI、ISI比较（x±s，
n＝10）
重复 3 次，再加入 IgG 二抗（稀释 2 000 倍），室温下孵育
组别 FINS/（mU/L） IRI ISI
1 h；再次重复上述清洗步骤，经ECL化学发光试剂显色
空白组 16.14±1.67 4.08±0.51 －4.51±0.13
处理，进行蛋白电泳系统及凝胶成像，以PPARγ、NF-κB 模型组 22.88±1.83 a 18.97±2.21 a －6.05±0.11 a
与内参β-actin条带灰度值的比值表示这2种蛋白的表达 阳性对照组 19.24±1.72 b 12.85±1.20 b －5.66±0.09 b
余甘子水提物高剂量组 20.26±1.71 b 13.16±1.28 b －5.69±0.10 b
水平，以 p-AMPK 与 AMPK 条带灰度值的比值表示 p-
余甘子水提物中剂量组 20.87±1.76 b 14.47±1.41 b －5.72±0.09 b
AMPK蛋白的表达水平。 余甘子水提物低剂量组 22.43±1.80 18.06±2.10 －6.11±0.14
2.10 统计学方法 F 19.573 115.681 266.052
P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001
采用 SPSS 25.0 软件进行数据分析。计量资料以
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
x±s 表示，多组间数据比较采用单因素方差分析，进一
3.4 余甘子水提物对大鼠肝组织病理形态的影响
步两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
空白组大鼠肝小叶结构保持完整，细胞排列规则，
3 结果
形态正常，未见脂质沉积；与空白组比较，模型组大鼠肝
3.1 余甘子水提物对大鼠一般状态及体质量的影响
小叶结构明显出现紊乱，肝细胞多发变形、肿大、排列紊
灌胃结束后，各组大鼠的一般状态出现明显差异。
乱，且有许多脂质沉积和脂肪空泡；与模型组比较，余甘
空白组大鼠活泼好动，精神良好，饮食及二便正常，体毛
子水提物高、中剂量组及阳性对照组大鼠肝小叶结构排
顺滑有光泽，整体状态较好，体质量为（348.70±18.22）
列更加规整，肝细胞形态、大小基本正常，脂质沉积相对
g。与空白组比较，模型组大鼠活动减少，精神萎靡，多
较少，未出现明显脂肪空泡，但余甘子水提物低剂量组
饮、多食、多尿现象明显，体毛粗糙无光泽，出现掉毛现
大鼠肝组织病理形态变化改善不明显。结果见图1。
象，整体状态差，体质量[（264.54±13.61）g]显著降低
（P＜0.05）。与模型组比较，余甘子水提物高剂量组大
鼠状态明显更佳，中剂量组大鼠状态稍次之，而低剂量
组大鼠状态几乎无改善；余甘子水提物高、中剂量组大鼠
体质量[（292.07±14.28）、（283.07±14.45） g]均显著升高
A.空白组 B.模型组 C.阳性对照组
（P＜0.05），而低剂量组大鼠体质量[（268.66±14.21） g]相
较于模型组差异无统计学意义（P＞0.05）。
3.2 余甘子水提物对大鼠血清脂代谢指标的影响
与空白组比较，模型组大鼠血清中 TC、TG、LDL-C
水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，余甘子水提 D.余甘子水提物高剂量组 E.余甘子水提物中剂量组 F.余甘子水提物低剂量组
物高、中剂量组及阳性对照组大鼠血清中TC、TG、LDL- 注：箭头所指为脂质沉积和脂肪空泡
图1 各组大鼠肝组织病理形态观察显微图（HE 染色，
C水平显著降低（P＜0.05）。结果见表1。
×400）
3.3 余甘子水提物对大鼠IR的影响
与空白组比较，模型组大鼠血清中FINS水平和IRI 3.5 余甘子水提物对大鼠肝组织糖原表达的影响
显著升高（P＜0.05），ISI 显著降低（P＜0.05）；与模型组 空白组大鼠肝组织中糖原位于细胞质，染色均匀、
比较，余甘子水提物高、中剂量组及阳性对照组大鼠血 密度高，染色面积为0.384±0.010。与空白组比较，模型
清中 FINS 水平和 IRI 显著降低（P＜0.05），ISI 显著升高 组大鼠肝组织糖原表达密度较低，糖原染色明显更少，
（P＜0.05）。结果见表2。 且呈不均匀分布，可见大量脂滴，染色面积（0.192±

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