Page 36 - 《中国药房》2023年2期
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于－80 ℃冰箱中待测。按ELISA检测试剂盒说明书检                         表1 各组小鼠血清中 IgE、OVA-IgE 含量检测结果
          测血清中的IgE、OVA-IgE含量。                                     （x±s，n＝8，pg/mL）
          2.4 BALF中相关细胞因子和黏蛋白含量的检测                            组别                   IgE             OVA-IgE
                                                              正常组               104.77±4.70       0.78±0.49
              各组小鼠取血后，脱颈椎处死，固定于小鼠解剖板                          模型组               177.14±7.17 a     5.91±0.45 a
          上，用 75% 乙醇消毒小鼠胸腹腔，进行气管内插管。右                         阳性对照组             114.45±6.26 b     2.08±0.64 b
                                                              五宝胶囊低剂量组          142.06±5.82 b     2.79±0.62 b
          肺用血管夹夹闭，左肺用0.6 mL磷酸盐缓冲液分2次灌
                                                              五宝胶囊高剂量组          129.64±5.46 b     1.55±0.31 b
          洗，每次冲洗 3 遍；回收并合并 2 次支气管肺泡灌洗液                           a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01
         （bronchoalveolar lavage fluid，BALF），于 4 ℃下以 1 000    3.2 五宝胶囊对小鼠BALF中ILC2s上游细胞因子IL-
          r/min离心10 min，取上清液按ELISA检测试剂盒说明书                    25、IL-33、TSLP的影响
          检 测 BALF 中 IL-5、IL-9、IL-13、IL-25、IL-33、TSLP、            如表 2 所示，与正常组比较，模型组小鼠 BALF 中
          MUC5AC的含量。                                          ILC2s上游细胞因子IL-25、IL-33、TSLP含量均显著升高
          2.5 肺组织病理变化和杯状细胞增生的观察                              （P＜0.01）；与模型组比较，五宝胶囊高、低剂量组和阳
              收集完小鼠 BALF 后，取各组小鼠右肺中叶，用磷                       性对照组小鼠 BALF 中 IL-25、IL-33、TSLP 含量均显著
          酸盐缓冲液冲洗后，滤纸吸干，置于4%多聚甲醛固定液                           降低（P＜0.01）。
          中 24 h 后，将组织切片并包埋于石蜡中，制备 5～8 μm                     3.3 五宝胶囊对小鼠BALF中ILC2s下游细胞因子IL-
          切片。用HE染色并评估分析小鼠肺组织炎性浸润情况                            5、IL-9、IL-13的影响
          和气管增厚情况；通过PAS染色观察各组小鼠气道杯状                               如表 2 所示，与正常组比较，模型组小鼠 BALF 中
          细胞的分布。                                              ILC2s 下游细胞因子 IL-5、IL-9、IL-13 含量均显著升高
          2.6 肺组织中ILC2s数量的检测                                 （P＜0.01）；与模型组比较，五宝胶囊高、低剂量组和阳
              收集完小鼠 BALF 后，分离除五宝胶囊低剂量组                        性对照组小鼠 BALF 中 IL-5、IL-9、IL-13 含量均显著降
         （由于在预实验中发现低剂量五宝胶囊没有药效，所以                             低（P＜0.01）。
                                                              3.4 五宝胶囊对小鼠肺组织病理变化的影响
          本实验没有分离五宝胶囊低剂量组）以外各组小鼠右肺
                                                                  如图1所示，正常组小鼠的肺组织结构完整，黏膜上
          上叶及下叶，并研磨成碎片，加入DNase Ⅰ和Liberase ，
                                                       TM
                                                              皮完整，气管平滑肌和基底膜正常，无明显增厚现象；模
          在37 ℃下消化20 min，用红细胞裂解液去除红细胞，制
                                                              型组小鼠气管、肺泡以及肺间质周围有大量炎症细胞浸
          成单细胞悬液后通过流式细胞术检测肺组织中 ILC2s
                                                              润，基底膜增厚严重，上皮增生；与模型组比较，五宝胶
                                                   －
                                               +
          的 数 量 。 流 式 配 色 方 案 为 7AAD CD45 LIN KLRG
                                          －
                                                              囊高、低剂量组和阳性对照组小鼠的炎症细胞浸润及基
               +
           +
          1 ST2 。
                                                              底膜增厚均有不同程度的缓解。
          2.7 统计学方法
                                                              3.5 五宝胶囊对小鼠肺组织杯状细胞增生的影响
              采用 GraphPad Prism 8 统计软件对数据进行分析，
                                                                  气道内的杯状细胞可分泌黏液，黏液中黏蛋白糖原
          检测结果以 x±s 表示。多组间比较采用单因素方差分
                                                              部分可被 PAS 染为蓝紫色。如图 2 所示，正常组小鼠气
          析 ，两 两 比 较 采 用 Bonferroni 法 检 验 。 检 验 水 准
                                                              道完整，无杯状细胞增生，未见黏液；模型组小鼠气道见
          α＝0.05。                                             大量蓝紫色，说明黏液较多，杯状细胞增生明显；五宝胶
          3 结果                                                囊高、低剂量组和阳性对照组小鼠气道内蓝紫色均有所
          3.1 五宝胶囊对哮喘小鼠血清中IgE、OVA-IgE的影响                      减少，可见杯状细胞增生和黏液分泌被抑制。如表2所
              如表 1 所示，与正常组比较，模型组小鼠血清中                         示，与正常组比较，模型组小鼠 BALF 中 MUC5AC 含量
          IgE、OVA-IgE 含量均显著升高（P＜0.01）；与模型组比                   显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，五宝胶囊高、低剂
          较，五宝胶囊高、低剂量组和阳性对照组小鼠血清中                             量组和阳性对照组小鼠 BALF 中 MUC5AC 含量均显著
          IgE、OVA-IgE含量均显著降低（P＜0.01）。                         降低（P＜0.01）。
                    表2 各组小鼠BALF中ILC2s上下游细胞因子和黏蛋白含量检测结果（x±s，n＝8，pg/mL）
           组别                IL-25        IL-33      TSLP        IL-5         IL-9        IL-13      MUC5AC
           正常组            534.49±74.36  288.74±35.61  203.56±13.62  77.38±5.22  626.78±47.55  129.10±28.50  0.81±0.14
           模型组           1 690.39±117.78 a  692.64±40.34 a  357.98±24.63 a  164.69±9.64 a  1 713.96±68.11 a  299.83±34.33 a  1.92±0.14 a
           阳性对照组          794.71±66.47 b  332.88±36.35 b  230.99±9.27 b  91.94±6.94 b  1 083.38±72.59 b  150.25±40.11 b  0.99±0.08 b
           五宝胶囊低剂量组      1 060.21±141.32 b  449.83±25.12 b  268.38±14.93 b  113.72±9.15 b  1 420.93±80.22 b  193.41±42.96 b  1.10±0.35 b
           五宝胶囊高剂量组       991.19±136.17 b  373.68±24.72 b  246.28±11.69 b  86.23±11.82 b  1 295.73±50.99 b  169.35±22.18 b  1.04±0.09 b
             a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01


          · 158 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 2                               中国药房  2023年第34卷第2期
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