Page 31 - 《中国药房》2023年2期
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肺部吸入微粒的要求 ）。                                      （47.5±0.7）% ，明 显 高 于 原 有 制 剂 Cur-SLN-DPI 的
                            [10]
          2.4.3 临界相对湿度的考察 精密称取Cur-SLN-FL适                   （25.8±0.6）%和Cur原料药的（9.8±0.4）%。普通的Cur
          量，将其均匀铺于预先精密称定质量的具塞玻璃称量瓶                           原料药无法满足肺部吸入制剂的要求，而原有制剂Cur-
                                                                                                           [9]
          底部，置于不同相对湿度（relative humidity，RH）的恒温               SLN-DPI 有效部位沉积率虽符合《中国药典》的要求 ，
          恒湿箱内，72 h后取出，精密称量，计算吸湿率。以吸湿                        但其在收集盘3～5级的比例明显低于Cur-SLN-FL。结

          率为纵坐标、RH 为横坐标作图，得吸湿平衡曲线                    [9，11] 。  果见图5。
          结果如图4所示。当RH大于52.89%时，Cur-SLN-FL的                     30
                                                                                                    Cur-SLN-FL
          吸湿增重明显上升，故本品的临界相对湿度约为 54%。                           25                                   Cur-SLN-DPI
                                                                                                    Cur原料药
          这可能与FL的α/β复合结晶态有关，相较吸入乳糖，FL                          20
          更易溶于水，因此在样品的储存中，尤其是高温潮湿的                            肺部沉积率/％  15
          季节，样品应置于避光的干燥器内。                                     10
                                                                5
                                                                0
                                                                       吸入装置+  预分离器  收集盘1级  收集盘2级  收集盘3级  收集盘4级  收集盘5级  收集盘6级  收集盘7级  微孔收集器
                  15                                                胶囊  适配器  人工喉


                  10                                         图5 空气动力学实验的各层级FPF的测定结果（x±s，
                 吸湿率/%                                            n＝3，%%）
                  5
                                                                 Cur-SLN-FL 实测 MMAD 为（4.33±0.08）μm，通常

                  0                                          认为MMAD在0.5～5 μm的微粒可被肺部有效吸收，而
                     20        30        40        50        60        70        80        90       100  4～5 μm 的颗粒可用来递送治疗呼吸系统疾病的药
                                  RH/％
                                                             物 ，可见本研究制备的Cur-SLN-FL符合相关要求。
                                                               [10]
           图4 不同RH下Cur-SLN-FL的吸湿百分率（25 ℃）
                                                             2.5 Cur-SLN-FL体外抑凋亡作用研究
          2.4.4 排空率的测定 取 10 粒装有 Cur-SLN-FL 的胶
                                                             2.5.1 统计学分析 采用 GraphPad Prism 5.0 软件和
                                                      ®
          囊，精密称定其质量（m1 ）；然后将胶囊置于 Aerolizer 吸
                                                             SPSS Statistics 软件进行统计分析。计量资料以 x±s 表
          入装置内，以（60±5）L/min的气流抽吸4次、每次1.5 s，
                                                             示，各组与模型组行方差分析。检验水准α＝0.05。
          称定其质量（m2 ）；用小刷拭净胶囊内的残留内容物，再
                                                             2.5.2 细胞培养 将 BEAS-2B 细胞培养于含 10% 胎牛
          称定囊壳质量（m3 ）。计算每粒胶囊的排空率：排空率
                                                             血清的 DMEM 培养液中，置于 37 ℃、5%CO2的培养箱
                                       [4]
         （%）＝（m1－m2 ）/（m1－m3 ）×100% 。试验重复 3 次，结
                                                                                  [12]
                                                             内，贴壁生长，消化、传代 。
          果得Cur-SLN-FL的排空率为（90.34±1.21）%。
                                                             2.5.3 空白 SLN-FL 浸提液的制备 在无菌条件下，将
          2.4.5 体外有效部位沉积率的测定 采用新一代多级
                                                             空白 SLN-FL 加入细胞培养液，在 37 ℃下浸提 24 h，制
          撞击器（next generation impactor，NGI）测定 Cur-SLN-
                                                             成不同质量浓度的空白SLN-FL浸提液。
                           [9]
          FL 的微细粒子剂量 。具体方法如下：以 2% 吐温-80
                                                             2.5.4 Cur-SLN-FL对BEAS-2B细胞的毒性检测 用含
          的乙醇溶液作为涂层液，选用 3 号羟丙基甲基纤维素
          胶囊分别装填相应的药物粉末（1 号样品：Cur-SLN-                       10% 胎牛血清的 DMEM 培养液制备 BEAS-2B 细胞悬
                                                             液。将 BEAS-2B 细胞以 1.0×10 个/孔接种于 96 孔板
                                                                                          4
          FL；2 号样品：原有制剂 Cur-SLN-DPI；3 号样品：Cur 原
          料药）各 15 mg，并装入单胶囊吸入给药装置，连接                         内，置于培养箱内培养（24±1）h，待细胞完全贴壁后，吸
          NGI 后进行测定，每次吸入 10 颗胶囊。吸入流速为                        取培养液，用PBS洗涤1次。换新鲜无血清培养液，将各
          60 L/min，吸入时长为 4 s。NGI 各级沉积的药物粉末                   培养孔分为样品对照孔（未经处理的对照细胞孔）、样品
          均用无水乙醇收集，按“2.1”项下色谱条件测定 Cur 含                      最大酶活性对照孔（未经处理的阳性细胞孔）和处理样
                                                    [10]
          量（M），计算可吸入细颗粒量（FPF）和 MMAD ，其                       品孔（Cur-SLN-FL 和空白 SLN-FL 处理的细胞孔）。处
                                    M                        理样品孔每孔分别加入 100 μL 不同质量浓度（16、8、4、
          中 ，FPF%＝                   2 ∼ 7级              ×
                     M                                       2、1 mg/mL）的空白 SLN-FL 浸提液和用培养液溶解的
                      (吸入装置 - 适配器 + 人工喉 + 预分离器 + 收集盘1 ∼ 7级 + 微孔收集器)
          100％。                                              不同质量浓度（16、8、4、2、1 mg/mL）Cur-SLN-FL溶液进
              经计算，Cur-SLN-FL 在收集盘 2～7 级中的 FPF 为              行处理，质量浓度设置参照课题组预试验结果。继续培


          中国药房  2023年第34卷第2期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 2    · 153 ·
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