Page 35 - 《中国药房》2023年2期
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downstream cytokines of ILC2s in BALF of asthmatic model mice， so as to inhibit the airway inflammation and improve asthma.
          KEYWORDS    Wubao capsule； type Ⅱ innate lymphoid cells； asthma； airway inflammation


              哮喘是世界范围内严重危害人类健康的一种气道                          盒（批 号 分 别 为 A20580821、A20980513、A21381132、
          慢性炎症性疾病       [1―2] 。2019 年《柳叶刀》报道，我国哮喘            A23380314、A26580933、A27581115）均购自杭州联科生
          患病率呈逐年增长的趋势，其中20岁以上人群哮喘患病                          物技术股份有限公司；IL-25（IL-17E）ELISA检测试剂盒
                                         [3]
          率为 4.2%，涉及人口超过了 4 500 万 。研究表明，除了                  （批号 M201211-007a）购自深圳欣博盛生物科技有限公
          获得性免疫外，固有免疫也被认为与哮喘有关 。在固                           司；黏蛋白 5AC（MUC5AC）ELISA 检测试剂盒（批号
                                                  [4]
          有免疫细胞中，Ⅱ型固有淋巴细胞（type Ⅱ innate lym‐                 ZKVBMELGV3）购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限
          phoid cells，ILC2s）被认为是通过释放辅助性 T 细胞                 公司；OVA-IgE ELISA 检测试剂盒（批号544983）购自美
         （helper T cell，Th）因子而导致嗜酸性气道炎症的关                    国 Cayman 公司；脱氧核糖核酸酶Ⅰ（deoxyribonuclease
                                                                                                     TM
          键 [5―6] 。过敏原可诱导气道上皮细胞产生白细胞介素25                     Ⅰ ，DNase  Ⅰ ；批 号 35027800）和 Liberase （批 号
         （interleukin 25，IL-25）、IL-33 和胸腺基质淋巴细胞生成            35537400）均购自瑞士Roche公司；水为超纯水。
          素（thymic stromal lymphopoietin，TSLP）。这些细胞因         1.3 动物
          子可激活 ILC2s 而产生 IL-4、IL-5、IL-9、IL-13 等炎症因               SPF级雌性6～8周龄的BALB/c健康小鼠40只，体
          子，并引起气道炎症        [7―10] 。                          质量为 18～20 g，购自辽宁长生生物技术股份有限公
              五宝胶囊又名“五宝散”（或“雅叫哈顿散”），为傣医                      司，动物生产许可证号为SCXK（辽）2020-0001。小鼠适
          传统解药名方，自 1977 年以来被历版《中国药典》所收                       应性饲养 1 周后开始实验，饲养温度 22～24 ℃，环境相
          载。五宝胶囊由小百部、藤苦参、苦冬瓜、箭根薯、蔓荆                          对湿度50%～60%。本实验经云南中医学院动物实验伦
          子茎叶以及羊耳菊根6味药等量组成，具有清热解毒、止                          理审查委员会批准，批准号为R-06201910。
          血止痛以及调平“风、火、水、土”四塔和“色、识、受、想、                       2 方法
          行”五蕴的功效，临床用来治疗寒热感冒、咽喉肿痛、虚                          2.1 试剂的制备
          劳心悸、咳嗽咯血、月经不调、气血不足、产后诸风、胸腹                         2.1.1 地塞米松药液 准确称取地塞米松粉末3.0 mg，
                                [11]
          胀痛和产后流血不止等症 。本课题组前期研究发现，                           用 30 μL 乙醇溶解后用生理盐水定容至 30 mL，配制成
          五宝胶囊能够改善气道炎症，可能通过调节 Th1/Th2 和                      0.1 mg/mL的溶液，置于4 ℃冰箱保存，使用前用涡旋仪
          Th17/调节性 T 细胞（Treg）的平衡来发挥防治哮喘的作                    混匀。
            [12]
          用 。本研究进一步探索了五宝胶囊对哮喘模型小鼠                            2.1.2 五宝胶囊溶液 称取五宝胶囊粉末 5.0 g，加入
          气道炎症及 ILC2s 上下游细胞因子的影响，以期为傣药                       50 mL的生理盐水溶解，制备成100 mg/mL的母液，再用
          五宝胶囊更广泛的临床应用和开发提供科学依据。                             生理盐水稀释为 50 mg/mL 的溶液，于 4 ℃冰箱中保存
          1 材料                                               备用。
          1.1 仪器                                             2.2 分组、造模和给药
              本研究所用主要仪器包括INQUA NEB plus型超声                       40 只小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组和
                                                                                                       [12]
          雾化仪（德国PARI公司）、AR224CN型分析天平[奥豪斯                     五宝胶囊低、高剂量组，每组8只。参考相关文献 建立
          仪器（上海）有限公司]、Spectra Max Plus 384型多功能酶              哮喘模型：模型组和给药组小鼠分别于第1、8、15天腹腔
          标仪（美国 Molecular Devices 公司）、1706 型离心机（德            注射 0.2 mL 含氢氧化铝的 OVA 致敏液（OVA 1 mg/mL、
          国 Hettich 公 司）、8920 型 超 低 温 冰 箱（美 国 Thermo         氢氧化铝5 mg/mL、生理盐水0.2 mL）；正常组小鼠腹腔
          Fisher Scientific公司）。                              注射 0.2 mL 生理盐水。从实验第 21 天开始，阳性对照
          1.2 主要药品与试剂                                        组小鼠每天灌胃1 mg/kg地塞米松药液，五宝胶囊低、高
                                                                                                          [12]
              五宝胶囊（批号170703，每粒含生药量0.2 g）购自云                  剂量组小鼠每天分别灌胃 0.5、1 g/kg 五宝胶囊溶液 ，
          南西双版纳药业有限公司；卵清蛋白（ovalbumin，OVA；                    正常组和模型组小鼠每天灌胃10 mL/kg生理盐水，连续
          批号 A5253）和地塞米松原料药（货号 D1756，纯度≥                     7 d。每次灌胃1 h后，将模型组和给药组小鼠置于雾化
          98%）均购自美国 Sigma 公司 ；纳米氢氧化铝（批号                      器内，予2%OVA溶液6 mL雾化激发，每天1次，每次30
          37801）购自阿拉丁科技（中国）有限公司；苏木精-伊红                       min；正常组小鼠予生理盐水雾化激发。
         （hematoxylin and eosin，HE）染色液（货号G1005）和过碘           2.3 血清中IgE、OVA-IgE含量的检测
          酸雪夫（PAS）染色液（货号G1008）均购自武汉赛维尔生                          最后一次雾化激发小鼠24 h后，各组小鼠腹腔注射
          物科技有限公司；IL-5、IL-9、IL-13、IL-33、TSLP、免疫球             1% 的戊巴比妥钠（0.01 mL/g）麻醉，剪除小鼠眼睛周围
          蛋 白 E（immunoglobulin  E，IgE）酶 联 免 疫 吸 附 试 验        毛发后，用 75% 的乙醇消毒，摘除眼球取血，血液静置 1
         （enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测试剂       h，于 4 ℃下以 3 000 r/min 离心 10 min，取上清液保存


          中国药房  2023年第34卷第2期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 2    · 157 ·
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