Page 29 - 《中国药房》2023年2期
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姜黄素（curcumin，Cur）可通过调节多种信号通路，                  体膜电位测定试剂盒（批号 093020201026）均购自上海
          发挥抗黏液分泌、改善气道重塑和减轻气道高反应等作                           碧云天生物技术有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试
          用，有望成为治疗肺部炎症性疾病的新型药物 。研究                           剂均为分析纯或实验室常用规格，水为纯净水。
                                                  [1]
          发现，Cur可显著抑制BEAS-2B细胞的增殖，提示Cur对                     1.3 实验细胞
          支气管上皮细胞介导的进行性炎症反应具有预防                                  BEAS-2B细胞购自湖南丰晖生物科技有限公司。
              [2]
          作用 。                                               2 方法与结果
              肺部吸入给药可能是提高Cur等难溶性药物生物利                        2.1 Cur的含量测定方法
                        [3]
                                                                                                [5]
          用度的有效途径 。将药物包裹于纳米载体内能减少药                               采 用 高 效 液 相 色 谱 法 进 行 检 测 。 色 谱 柱 为
          物对肺部的不良反应，降低药物对肺黏膜纤毛的损伤。                           Agilent C18 （150 mm×5 mm，4.6 μm）；流动相为乙腈-5%
          本课题组前期曾采用微乳法制备了姜黄素固体脂质纳                            冰醋酸溶液（55∶45，V/V）；检测器为紫外检测器；检测波
          米粒（Cur-SLN），将其微粉化后与载体乳糖（200 目）和                    长为 426 nm；流速为 1.0 mL/min；柱温为 35 ℃；进样量
          第三组分乳糖充分混匀后，制得 Cur-SLN 干粉吸入剂                       为20 μL。
         （Cur-SLN-DPI），经测定其平均粒径约为 3.35 μm、排空                 2.2 Cur-SLN混悬液的制备
                                                 [4]
          率为 95.17%、体外有效部位沉积率为 28.73% ，但该制                       称取处方量的泊洛沙姆 188 和吐温-80，在 75 ℃磁
          剂存在药物从载体上分离效率低的问题。本研究采用                            力搅拌下加入适量水作为水相；另称取处方量的Cur、单
          课 题 组 自 主 研 发 的 花 形 乳 糖（flower-shaped  lactose，    硬脂酸甘油酯和 PEG-40 硬脂酸酯，在相同温度和转速
          FL） [5―6] 对原有 Cur-SLN-DPI 中的载体乳糖和第三组分              下加入适量无水乙醇，完全溶解后作为有机相。在
          乳糖进行替换，构建纳米多孔 FL 装载 Cur-SLN 吸入微                    80 ℃、1 020 r/min 恒温磁力搅拌下，将有机相缓慢注入
          粉（Cur-SLN-FL），并通过修饰载体表面的粗糙度，提高                     水相中，滴加完毕后，继续恒温搅拌3 h使其浓缩。趁热
          该微粉的分散性，改善药物的体外肺部有效部位沉积效                           将热乳液以 1∶1（V/V）加入 0～2 ℃的冷水中，低温固化
          率；然后，以人支气管上皮细胞 BEAS-2B 为对象，探讨                      2 h，即得黄色的 Cur-SLN 混悬液，于 4 ℃下保存。同法
          该吸入微粉作为肺部递药系统对气道上皮细胞的安全                            制备空白SLN混悬液，备用 。
                                                                                    [7]
          性和作用机制，以期为该吸入微粉的进一步研发提供理                           2.3 Cur-SLN-FL的工艺优化及制备
          论依据。                                               2.3.1 单因素实验优化 Cur-SLN 的冻干保护剂 基于
          1 材料                                               课题组的前期研究 ，本研究仅对 Cur-SLN 的冻干保护
                                                                              [7]
          1.1 主要仪器                                           剂进行考察。冻干保护剂的种类和浓度与其对样品的
              本研究所用主要仪器有SPD-M20A型紫外检测器、                      保护作用直接相关。量取同体积的Cur-SLN混悬液，加
          LC-20A型高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司），FDU-                  入不同种类（乳糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖）和不同用量
          2110 型冷冻干燥机（日本 EYELA 公司），SZ-100 型纳米               （2%、3%、5%）的冻干保护剂，混匀、分装后，放入冷冻干
          粒度仪（日本 Horiba 公司），S-3400N 型扫描电子显微镜                 燥机的程序冻干仓内进行程序冷冻干燥。设置真空冻
         （日本Hitachi公司），HELOS-OASIS型激光粒度仪（德国                  干程序约 48 h，完成干燥后即得 Cur-SLN 冻干粉。以冻
                                                                                                        [8]
          Sympatec 公司），Sigma-3k30 型高速冷冻离心机（德国                干粉的外观形态、色泽、再分散性为主要评价指标 ，评
          Sigma-Aldrich 公司），DNM-9602 型酶标仪（北京普朗新              分标准见表1，综合评分结果见表2。最终优选出3%海
                                ®
          技术有限公司），Aerolizer 吸入装置（澳大利亚 Novartis               藻糖为 Cur-SLN 冻干保护剂。以此条件所得冻干粉外
          Pharmaceutical 公司），新一代多级撞击器（英国 Copley              形致密、饱满、不回缩塌陷，为色泽均匀的淡黄色粉末，
          公司）等。                                              30 s可完全溶解。
          1.2 主要药品与试剂                                               表1 Cur-SLN冻干粉的指标评分标准
              Cur原料药（批号TZSW200317-1，纯度99.0%）购自                评分          外观              色泽          再分散性
                                                              0～2     褶皱、回缩、明显多孔       分层，上下色差明显      ＞90 s
          西安通泽生物科技有限公司；海藻糖购自艾伟拓（上海）
                                                              3～5     褶皱、回缩、多孔         分层，上下色差不明显     60～90 s
          医药科技有限公司；FL（批号 20210312）为实验室自制。                     6～8     褶皱、略有回缩、多孔不明显    上下色差不明显        30～60 s
          DMEM 完全培养液、1640 完全培养液和胰蛋白酶均购                        9～10    致密、饱满、不回缩塌陷      均匀无色差          ＜30 s
          自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；胎牛血清均购                           2.3.2 优选冻干工艺所制 Cur-SLN 冻干粉的理化性质
          自 美 国 Gibco 公 司 ；脂 多 糖（LPS）购 自 美 国 Sigma-          评价 取Cur-SLN冻干粉，测定样品冻干前和冻干后再
                                                                                                      [7]
          Aldrich 公司；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）        分散混悬液的粒径、多分散性指数和包封率（%） ；采用
          细胞毒性检测试剂盒（批号042721220221）、Annexin Ⅴ/               透射电镜观察 Cur-SLN 冻干粉的形态。结果见表 3
          PI细胞凋亡检测试剂盒（批号092120201215）、JC-1线粒                 和图1。


          中国药房  2023年第34卷第2期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 2    · 151 ·
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