Page 23 - 《中国药房》2023年2期
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麻 黄 细 辛 附 子 汤(Mahuang xixin fuzi decoction, 1.3 动物
MXF)始见于东汉张仲景的《伤寒论》,组方严谨、短小精 48 只 SPF 级雄性 BABL/C 小鼠,体质量为(20±2)
练,是治疗少阴阳虚兼外感病证的经典方剂 ,在临床应 g,由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供,动物生产许
[1]
用广泛。现代药理研究发现,MXF对感染普通流感的小 可证号为 SCXK(鲁)2021-1007,动物使用许可证号为
鼠和肾阳虚外感证模型小鼠均具有良好的药效作 SYXK(鲁)20170022。本实验方案经山东中医药大学伦
用 [2―3] 。随着中药在全球的广泛应用,有关中药不良反 理委员会批准,批准号为SDUTCM2021030320。
应的报道越来越多。研究指出,MXF组方中麻黄、细辛、 2 方法
[4]
附子3味药均为有毒中药 。麻黄中含有多种苯丙胺类 2.1 MXF的制备
生物碱,其药理、毒理作用与冰毒类毒品较为相似,服用 参照文献[10]的煎煮方法进行制备:取麻黄15 g(去
过量会导致中枢神经兴奋、血压升高、紫绀等毒副作 节),加蒸馏水1 000 mL浸泡30 min,大火煮沸至一定量
[5]
用 。细辛中的挥发性成分易引起呼吸毒性,大剂量服 后除去泡沫,加入细辛 15 g 和炒附片 7.5 g,小火使其稍
[6]
用会引起肝肾毒性,甚至可导致严重的肾衰竭 。附子
微沸腾至 300 mL。药液冷冻干燥后加入蒸馏水,用 50
[7]
作为有毒中药,其毒/效成分均为双酯型生物碱 。目前
mL容量瓶定容,获得质量浓度为0.75 g/mL的浓缩药液
对于 MXF 复方及单味药的毒性作用研究较多,但其主
(以生药量计,下同)。
要作用机制有待进一步研究。
2.2 动物分组及给药
代谢组学能够通过多个学科技术的交叉互助,明确
48 只小鼠适应性喂养 3 d 后,随机分为空白组和
不同代谢模式下代谢物的变化,综合评价给药前后生物
MXF低、中、高剂量组(给药剂量分别为11.262、33.786、
体液中小分子代谢物轮廓的改变,评价或预测药物疗效
45.050 g/kg,分别为10、30、40倍人体临床剂量),每组12
[8]
和毒性 。其中,粪便代谢物作为肠道菌和宿主共代谢
只。小鼠按照20 mL/kg灌胃,空白组小鼠灌胃等体积生
的产物,检测粪便中的代谢产物,能够提供丰富的代谢
理盐水,其余各组分别灌胃相应药物,每日1次,连续灌胃
组学信息,反映宿主机体以及肠道菌的状态 。本研究
[9]
7 d。收集小鼠末次灌胃后12 h的粪便样品,置于-80 ℃
选择具有“效-毒二重性”的MXF为研究对象,以粪便代
冰箱保存备用。
谢组学方法为研究手段,采用超高效液相-质谱联用
2.3 毒性作用指标测定
(UHPLC-QE/MS)技术研究低、中、高剂量 MXF 灌胃正
实验期间每天测量小鼠体质量、肛温,并观察小鼠
常小鼠后,小鼠粪便中内源性代谢物的变化,以期从微
生存情况。末次灌胃后,处死小鼠,取各组小鼠心、肝、
观角度阐释MXF对小鼠的毒性作用机制,为MXF的临
脾、肺等脏器,计算脏器指数(脏器指数=脏器质量/体质
床安全和规范化用药提供依据。
量×100)。测定各组小鼠血清中的心肌功能指标:肌酸
1 材料
激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine ki‐
1.1 主要仪器
nase isoenzyme,CK-MB)、CK-MB/CK比值、α-羟丁酸脱
本研究所用的主要仪器有Ultimate 3000-Q-Exactive
氢酶(α-hydroxybutyrate dehydrogenase,α-HBDH)、乳酸
型超高效液相-四极杆-傅里叶变换质谱仪(美国Thermo
脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH);肝功能指标:丙氨
Fisher Scientific 公司),DW-HL668 型超低温冰箱(中科
酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转
美菱低温科技股份有限公司),DXL-XS 型小鼠代谢笼
氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、AST/ALT比值和
(苏州市冯氏实验动物设备有限公司),NJ 08818型涡旋
仪(美国SI公司),ZIL-2型小鼠自主活动仪(上海欣曼科 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP);肾功能指标:尿
教设备有限公司),01193-YP601N 型电子天平(上海精 素、肌酐、胱抑素C(cystatin C,CYS-C)等。
密科学仪器有限公司),LabMaster-CaloSys 型动物代谢 2.4 小鼠粪便代谢组学研究
测量分析系统(德国TSE公司)。 2.4.1 溶液的制备 (1)内标溶液:精密称取 L-2-氯苯
1.2 主要药品与试剂 丙氨酸 3.20 mg,加甲醇定容至 10 mL,得到 320 μg/mL
麻 黄 、细 辛 饮 片( 批 号 分 别 为 401003136P、 的母液。吸取母液 100 μL,加甲醇定容至 10 mL,得到
401002360P)均购自北京同仁堂(亳州)饮片责任有限公 质量浓度为3.20 μg/mL的内标溶液。(2)供试品溶液:称
司,炒附片(批号191201)购自四川江油中坝附子科技发 取 200 mg 粪便样本,加入 600 μL 甲醇和 20 μL 内标溶
展有限公司,以上饮片经山东中医药大学药学院李峰教 液,涡旋 10 min 混合,以 12 000 r/min 离心 20 min,吸取
授鉴定均为真品。L-2-氯苯丙氨酸购自上海源叶生物科 300 μL上清液;重复上述操作1次,合并上清液,作为供
技有限公司;乙腈、甲酸为色谱纯,水为蒸馏水。 试品溶液。(3)质量控制(QC)样本溶液:从空白组和
中国药房 2023年第34卷第2期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 2 · 145 ·