Page 20 - 《中国药房》2022年24期
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克班宁[crebanine（Cre），化学结构式见图 1]是从防                1.3 实验动物
          己科千金藤属云南地不容 Stephania yunnanensis H. S.                 SPF 级 SD 大鼠 54 只，雌雄各半，体质量 180～220
                           [1]
          Lo中提取的生物碱 ，具有抗炎、抗心律失常、抗肿瘤作                          g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物生产许
          用，临床价值较高        [2－9] 。但有研究表明，Cre 的半数致死             可证号为SCXK（湘）2019-0004。
          量（median lethal dose，LD50 ）为 9.382 mg/kg，毒性较大，      2 方法与结果
          使得其研发和应用受到了限制 。聚乙二醇-（聚乳酸-羟                          2.1 溶液的制备
                                    [6]
          基乙酸）-聚乙二醇三嵌段共聚物[polyethylene glycol-                2.1.1 对照品溶液 精密称取 Cre 对照品适量，用甲醇
          poly  lactide（acid-hydroxyacetic  acid）-poly  ethylene  gly‐  溶解制成质量浓度为 1 000 μg/mL 的储备液，再用甲醇
          col triblock copolymer），PELGE]的生物相容性较好，可            进一步稀释制成质量浓度为 520、260、130、65、32.5、
          延 长 药 物 在 血 液 中 的 循 环 时 间 ，并 缩 短 其 代 谢 时            16.25、8.125 μg/mL 的系列标准溶液，于 4 ℃条件下保
          间 [10－11] ，故本课题组前期制备了以 PELGE 为载体的 Cre               存，备用。
          纳米粒（PELGE-Cre-NPs）。相关药动学研究结果显示，                     2.1.2 内标溶液 精密称取内标2 mg，置于10 mL容量
          与 Cre 注射液相比，PELGE-Cre-NPs 在家兔体内的滞留                  瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为

                      [12]
          时间显著延长 。有研究指出，药物在不同生物体内存                            200 μg/mL的内标溶液，于4 ℃条件下保存，备用。
                            [13]
          在质或量的种属差异 。基于此，本研究拟进一步探讨                            2.2 生物样品处理方法
          PELGE-Cre-NPs 在大鼠体内的组织分布情况及组织药                          取大鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑组织样品各适量，精
          动学特征，以期为该制剂后续的药效学研究提供理论基                            密称定，分别加生理盐水少许，用组织匀浆机以 5 000
          础支撑。                                                r/min 匀浆，再加生理盐水，制成每 3 mL 含 1 g 组织的样
                                                              品。精密吸取上述组织样品 0.5 mL，置于离心管中，精
                             O
                             O       N                        密加入“2.1.2”项下内标溶液 20 μL、甲醇 20 μL、乙酸乙
                                                              酯 3 mL，涡旋萃取 3 min，再以 4 000 r/min 离心 10 min，
                                    O                         吸取上层有机相2.4 mL，置于5 mL离心管中，于50 ℃水
                                 O
                                                              浴中以氮气流吹干，残渣加甲醇200 μL，涡旋1.5 min复
                        图1 Cre的化学结构式
                                                              溶，经 0.22 μm 滤膜滤过，取续滤液 20 μL 进行 HPLC
          1 材料
                                                              分析。
          1.1 主要仪器
                                                              2.3 样品分析方法的建立与验证
              本研究所用主要仪器包括1260 Infinity型高效液相                   2.3.1 色谱条件 以 Agilent ZORBAX Extend-C18 （4.6

          色谱（HPLC）仪（美国Agilent公司）、HSC-12A型氮吹仪                  mm×250 mm，5 μm）为色谱柱，甲醇-0.01%三乙胺溶液
         （天津市恒奥科技发展有限公司）、XHF-1型内切式匀浆                         （75∶25，V/V）为流动相；流速为 1 mL/min；检测波长为
          机（宁波新芝生物科技股份有限公司）、TGL-16G型台式                        280 nm；柱温为30 ℃；进样量为20 μL。
          离心机（上海安亭科学仪器厂）、XK96-A 型快速混匀器                        2.3.2 方法学考察 （1）专属性考察：分别取未给药大
         （姜堰市新康医疗器械有限公司）等。                                    鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑组织适量，除不加Cre对照品和
          1.2 主要药品与试剂                                         内标溶液外，其余按“2.2”项下方法处理后，制成空白组
              PELGE-Cre-NPs（批 号 2016011003，Cre 含 量 1.5        织匀浆液，按“2.3.1”项下色谱条件进样分析，得大鼠空
          mg/mL，包封率 90.32%）、Cre 对照品（批号 20141101，纯             白组织样品色谱图（图略）；将一定量的 Cre 对照品溶液
          度99.2%）均由云南中医药大学药剂实验室自制（制备方                        （5 μg/mL）加入空白组织匀浆液中，按“2.2”项下方法处
          法参考文献[14]）；盐酸维拉帕米对照品（内标，批号                          理后，再按“2.3.1”项下色谱条件进样分析，得含对照品
          100223-200102，供含量测定用）购自中国食品药品检定研                    和内标空白组织样品的色谱图（图2A）；尾静脉给药后5
          究院；氯化钠注射液（批号2106304B，规格500 mL∶4.5 g）                min 处死大鼠，取各组织并制备得含药的心、肝、脾、肺、

          购自安徽双鹤药业有限责任公司，作生理盐水用；75%                           肾、脑组织匀浆液样品，按“2.2”项下方法处理后，再按
          乙醇（批号121002）购自昆明远方生物制品有限公司；甲                       “2.3.1”项下色谱条件进样分析，得含药组织样品的色谱
          醇为色谱纯，乙酸乙酯等其余试剂均为分析纯，水为纯                            图（图2B）。由图2可知，大鼠各组织中的内源性物质对
          化水。                                                 Cre和内标的测定无干扰。


          · 2958 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 24                            中国药房  2022年第33卷第24期
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