Page 60 - 《中国药房》2022年23期
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多 囊 卵 巢 综 合 征（polycystic  ovary  syndrome，      生物工程研究所（批号分别为F006-1-1、H203-1-2、H102-1、
          PCOS）是以月经失调、慢性无排卵、雄激素升高及卵巢                          H090-1-2、H297、H101-1-2、H206-1-2）；兔 SP 试 剂 盒 、
          多囊样改变为主要表现的一种妇科疾病，常伴发生殖功                            DAB 显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司
          能障碍、胰岛素抵抗等代谢异常症状，亦可增加心血管                           （批号分别为SP-9001、ZLI-9018）；兔抗大鼠LKB1抗体、
                                   [1]
          疾病、子宫内膜癌的患病风险 。目前，西医治疗多以激                           兔 抗 大 鼠 AMPK 抗 体 、TriQuick 总 RNA 提 取 试 剂 、
          素替代、调经及促排卵为主，患者妊娠率低，且可出现子                           cDNA合成试剂盒均购自武汉赛维尔生物科技有限公司
          宫异常出血、胃肠道不适、肝功能损害及肥胖等多种副                           （批号分别为GB111236、GB111919、R1100、G3330）。
          作用  [2―3] 。中医将 PCOS 归为“不孕症”“闭经”“月经过                 1.3 动物
          少”“月经后期”“癥瘕”范畴，认为其病机是肾虚，继发肝                             本研究所用动物为健康 SD 雌性大鼠，8 周龄，体质
          瘀、脾虚、痰饮、水湿互结          [4―5] ，故应从补益脾肾入手进行            量 180～200 g，购自郑州市惠济区华兴实验动物养殖
              [6]
          治疗 。金匮肾气丸始载于《金匮要略》，乃“千古补肾之                          场，动物生产许可证号为SCXK（豫）2019-0002。所有大
          组方”，其对妇科疾病的治疗论述最早见于《妇人杂病脉                           鼠分笼饲养于河南中医药大学医学机能实验室，室温为
          证并治第二十二》，具有温补肾阳、化气行水的功效，且                           20～22 ℃，相对湿度为55%～60%，正常光照，大鼠自由
                                  [7]
          已有治疗PCOS的临床报道 ，但此方面实验研究较少，                          饮水采食。本实验获河南中医药大学实验动物伦理委
          作用机制亦不明确。目前，相关研究发现，金匮肾气丸                            员会批准，批准号为DWLL202201010。
                                          [8]
          可改善糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗 ，其中肝激酶 B1                           2 方法
         （liver kinase B1，LKB1）/腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-                2.1 分组、造模与给药
          activated protein kinase，AMPK）信号通路与胰岛素抵抗                取雌性SD大鼠50只，适应性饲养1周后，随机选取
                  [9]
          密切相关 ，但是金匮肾气丸是否可通过 LKB1/AMPK
                                                              10只为正常组，其余大鼠按1 mg/kg灌胃来曲唑混悬液，
          信号通路改善 POCS 尚不明确。基于此，本研究选择炔
                                                              每天1次，连续21 d，以复制PCOS模型。造模第16天开
          雌醇环丙孕酮片(商品名为达英-35，以下简称“达英-35”）
                                                              始进行阴道涂片检测，当显微镜下可见阴道上皮细胞持
          联合二甲双胍为阳性对照药物              [9―10] ，探讨金匮肾气丸对         续角化，则表明造模成功 。将造模成功的大鼠随机分
                                                                                   [10]
          胰岛素抵抗、性激素水平、卵巢病理形态变化及 LKB1/
                                                              为模型组、达英-35+二甲双胍组（达英-35 0.2 mg/kg+二
          AMPK 信号通路的影响，以期为金匮肾气丸治疗 PCOS                        甲双胍230 mg/kg，两药剂量均为临床等效剂量）和金匮
          提供实验依据。
          1 材料                                                肾气丸低、中、高剂量组（0.5、1.0、2.0 g/kg，中剂量为临床
                                                              等效剂量），每组10只。正常组和模型组大鼠灌胃等体
          1.1 主要仪器
                                                              积 0.1% CMC-Na 溶液，各给药组灌胃相应药物，每天 1
              本研究所用主要仪器有 BS110S 型电子天平（北京
                                                              次，连续30 d。
          塞多利斯天平公司）、MR-96TB 型酶标仪[骋克仪器（上
          海）有限公司]、RM2235 石蜡切片机（德国 Leica 公司）、                  2.2 取材及处理
                                                                  各组大鼠末次灌胃24 h后，称质量，腹腔注射1 g/kg
          D3024R 型台式高速冷冻型微量离心机[大龙兴创实验
                                                              氨基甲酸乙酯麻醉，腹主动脉取血，以 3 000 r/min 离心
          仪器（北京）股份有限公司]、CX23 型光学显微镜（日本
                                                              10 min，取上清液于－80 ℃下保存备用。取血完成后，
          Olympus 公司）、Stepone plus 型荧光定量 PCR 仪（美国
                                                              处死大鼠，剖取卵巢，去除周围组织，生理盐水洗涤，观
          ABI公司）。
          1.2 主要药品与试剂                                         察卵巢外观形态，滤纸吸尽脏器表面液体后用电子天平
                                                              称质量，然后将卵巢组织一分为二，其中一份用4%多聚
              金匮肾气丸购自北京同仁堂科技发展股份有限公
          司制药厂（批号 19032632，规格 0.2 g/粒）；达英-35 购自               甲醛固定，另一份用液氮速冻后于－80 ℃下储存。
          德国拜耳医药保健有限公司（批号 KT062FL2，规格 0.2                     2.3 大鼠血清中血糖等指标水平检测及胰岛素抵抗指
          mg/片）；盐酸二甲双胍片购自上海寿如松药业泌阳制药                          数计算
          有限公司（批号 20031702，规格 0.25 g/片）；来曲唑购自                     取“2.2”项下血清样品，按照试剂盒说明书方法操
          上海麦克林生化科技有限公司（批号 C12785740）；羧甲                      作，采用酶标仪检测血糖、胰岛素、E2、T、GnRH、FSH、LH
          基纤维素钠（CMC-Na）购自国药集团化学试剂有限公司                         水平；并计算胰岛素抵抗指数，胰岛素抵抗指数＝空腹
         （批号 20160704）；苏木素染色液、伊红染色液均购自福                       血糖×空腹胰岛素/22.5。
          州 飞 净 生 物 科 技 有 限 公 司（批 号 分 别 为 190805、             2.4 大鼠卵巢系数的计算
          20211009）；葡萄糖、胰岛素、雌二醇（estrogen，E2 ）、睾酮                  记录各组大鼠卵巢质量与体质量，并计算卵巢系
         （testosterone，T）、促性腺激素释放激素（gonadotropin-             数，卵巢系数＝卵巢质量/体质量。
          releasing hormone，GnRH）、促卵泡素（follicle-stimulating   2.5 大鼠卵巢组织病理形态学观察
          hormone，FSH）、促黄体生成素（luteinizing hormone，LH）             取“2.2”项下用4%多聚甲醛固定的卵巢组织，经梯
          的酶联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒均购自南京建成                          度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切片（4 μm）后制作


          · 2870 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 23                            中国药房  2022年第33卷第23期
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