Page 77 - 《中国药房》2022年22期

2.2.3 阴性样品溶液 按蒲蓝利咽合剂处方工艺分别 B（13 号峰）、黄芩苷（14 号峰，由于其保留时间居中，将
制备缺黄芩或蒲公英或忍冬藤或木蝴蝶以及同时缺蒲 其作为参照峰）、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸（17号
公英和忍冬藤（因两者均含有咖啡酸）、黄芩和木蝴蝶 峰）、汉黄芩苷（18号峰）。
（因两者均含有黄芩苷）的阴性样品，按“2.2.2”项下方法
500 14 A.混合对照品溶液
制备各阴性样品溶液。 5
400 7 8
2.3 蒲蓝利咽合剂HPLC指纹图谱的建立 9 13 17 18
300 14
2.3.1 精密度试验 精密量取编号为 S11 的供试品溶 U/mV B.供试品溶液
液，按“2.1”项下色谱条件连续进样 6 次，记录峰面积。 200
以黄芩苷为参照峰，结果显示，各共有峰相对保留时间 100 9 17 18
5 7 8 13
和 相 对 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 0.010%～0.234%、 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
0.083%～2.935%（n＝6），表明方法精密度良好。 t/min
5：绿原酸；7：咖啡酸；8：马钱苷；9：菊苣酸；13：木蝴蝶苷B；14：黄
2.3.2 重复性试验 精密量取编号为 S11 的样品，共 6
芩苷；17：千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸；18：汉黄芩苷
份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下
图2 混合对照品溶液与供试品溶液（编号 S11）的叠加
色谱条件进样，记录峰面积。以黄芩苷为参照峰，结果
HPLC图
显示，各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别
为 0.025%～0.481%、0.140%～2.777%（n＝6），表明方法 2.4 HPLC指纹图谱的化学模式识别分析
重复性良好。 2.4.1 聚类分析 将11批样品的20个共有峰相对峰面
2.3.3 稳定性试验 精密量取编号为 S11 的供试品溶 积导入SPSS 20.0软件，采用组间联结法，以平方欧氏距
液，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时按“2.1”项下 离为区间进行聚类分析。结果显示，当平方欧氏距离为
色谱条件进样，记录峰面积。以黄芩苷为参照峰，结果 10时，11批样品分为2大类，其中S3、S10～S11为一类，
显示，各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别 其余为一类。结果见图3。
为 0.034%～0.630%、0.272%～2.865%（n＝6），表明供试
平方欧氏距离
品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。 0 5 10 15 20 25
S1
2.3.4 指纹图谱的生成和相似度评价 取11批样品，按 S2
“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条 S5
件进样，记录色谱峰。将所得的色谱图采用《中药色谱 S9
S6
指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》软件进行分析，以
S4
峰面积适中的 S11 样品为对照图谱，选择中位数计算，
S8
采用多点校正生成 HPLC 叠加指纹图谱和对照指纹图 S7
谱（R）。结果显示，11 批样品共有 20 个共有峰，详见图 S3
1。11批样品的相似度分别为0.988、0.990、0.991、0.985、 S11
S10
0.991、0.989、0.973、0.981、0.989、0.994、0.993。
图3 11批蒲蓝利咽合剂的聚类分析树状图
14
3 9 11 16 17 18
350 1 2 4 5 67 8 10 12 13 15 19 20 2.4.2 主成分分析 以11批样品的20个共有峰相对峰
R
300 S11 面积为变量，运用 SPSS 20.0 软件进行主成分分析（表
S10
250
S9 1）。结果显示，前 4 个主成分的累计方差贡献率为
200 S8
U/mV 150 S7 95.546%，表明这 4 个主成分能够反映指纹图谱共有峰
S6
S5 的主要信息。采用 SIMCA14.1 软件进行无监督模式的
100 S4
50 S3 主成分建模分析（图4）。结果显示，11批样品分为2类，
S2
0 S1 S3、S10～S11 为一类，其余为一类，与聚类分析结果
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 一致。
t/min
图1 11批蒲蓝利咽合剂的HPLC叠加指纹图谱和对照 表1 4个主成分因子的特征值和方差贡献率
指纹图谱（R） 主成分 特征值 方差贡献率/% 累计方差贡献率/%
1 13.647 68.234 68.234
2.3.5 共有峰指认 经过与相应对照品图谱（图 2）比
2 2.779 13.893 82.127
对，共指认出 8 个色谱峰，分别为绿原酸（5 号峰）、咖啡 3 1.586 7.929 90.057
酸（7号峰）、马钱苷（8号峰）、菊苣酸（9号峰）、木蝴蝶苷 4 1.098 5.489 95.546

中国药房 2022年第33卷第22期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 22 · 2755 ·