Page 52 - 《中国药房》2022年22期
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前，有研究采用大孔吸附树脂富集后结合制备型高效液                              400         诃黎勒酸        500
          相色谱、高速逆流色谱等方法分离制备诃黎勒酸、诃子                                               诃子酸    400         诃黎勒酸
                                                                300
          酸，但分离过程复杂、产率低、成本高              [9－10] 。为此，本研究        mAU  200                mAU  300          诃子酸
          以诃黎勒酸和诃子酸含量为指标，优化2种成分的提取、                                                     200
                                                                100                     100
          分离工艺，得到其纯品，旨在为诃子药材药效物质研究
                                                                 0                       0
          及质量控制提供基础。                                              0      5       10   15    20   25  30   35   40   45   50   55  0      5       10    15    20   25   30    35   40   45   50   55
                                                                          t/min                   t/min
          1 材料                                                        A.混合对照品溶液                B.供试品溶液
          1.1 主要仪器                                               图1 混合对照品溶液、供试品溶液的HPLC图
              本研究所用主要仪器有Agilent 1100型高效液相色                    子酸质量浓度分别为 206.5、103.3、51.63、25.81、12.91、
          谱仪（美国 Agilent 公司）、FA1004B 型分析天平（上海精                 6.453、3.227 μg/mL的系列线性工作溶液，取上述系列线
          密科学仪器有限公司）、DFT-100 型粉碎机（温岭市林大                       性工作溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录峰
          机械有限公司）、410HTD 型数码超声波清洗机（深圳市                        面积。以待测成分的质量浓度为横坐标（X）、峰面积为
          洁拓超声波清洗设备有限公司）等。                                    纵坐标（Y）进行回归分析。结果显示，诃黎勒酸的回归
          1.2 主要药品与试剂                                         方程为 Y＝11.815X－9.087 9（r＝0.999 9），诃子酸的回
              诃黎勒酸对照品（批号 PRF8112302）、诃子酸对照                    归方程为 Y＝11.846X－4.200 0（r＝0.999 9），表明诃黎
          品（批号PRF8071201）均购自成都普瑞法科技开发有限                       勒酸质量浓度在3.266～209.0 μg/mL、诃子酸在3.227～
          公司，纯度均大于 98%；甲醇为色谱纯，乙醇、磷酸均为                         206.5 μg/mL范围内线性关系良好。
          分析纯，水为超纯水。诃子药材于2019年购自河北安国                          2.1.6 精密度试验 取“2.1.3”项下供试品溶液，按
          药材市场（产地云南），经辽宁中医药大学药学院翟延君                          “2.1.1”项下色谱条件连续进样 6 次，记录峰面积。结果
          教授鉴定为使君子科植物诃子T. chebula Retz.的干燥成                   显示，诃黎勒酸、诃子酸峰面积的 RSD 分别为 0.72%、
          熟果实。                                                0.89%（n＝6），表明方法精密度良好。
          2 方法与结果                                             2.1.7 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液，分别于
          2.1 诃黎勒酸和诃子酸含量测定方法的建立                               室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1.1”项下色谱条件
          2.1.1 色谱条件 以 Diamonsil Plus C18 （250 mm×4.6         进样分析，记录峰面积。结果显示，诃黎勒酸、诃子酸峰
          mm，5 μm）为色谱柱，以 0.1% 磷酸溶液（A）-甲醇（B）为                  面积的RSD分别为0.98%、1.10%（n＝6），表明供试品溶
          流动相进行梯度洗脱（0～8 min，5%B→10%B；8～15                     液在室温下放置24 h内稳定性良好。
          min，10%B→25%B；15～25  min，25%B；25～30  min，           2.1.8 重复性试验 取诃子粉末，共6份，按“2.1.3”项下
          25%B→30%B；30～50 min，30%B→45%B；50～55 min，            方法平行制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进
          45%B）；进样量为 10 μL；流速为 1.0 mL/min；柱温为                 样分析，记录峰面积并按外标一点法计算样品含量。结
          30 ℃；检测波长为270 nm。                                   果显示，诃黎勒酸、诃子酸含量的 RSD 分别为 1.30%、
          2.1.2 混合对照品溶液的制备 取诃黎勒酸、诃子酸对                         1.20%（n＝6），表明方法重复性良好。
          照品适量，精密称定，加甲醇制成诃黎勒酸、诃子酸质量                           2.1.9 加样回收率试验 分别称取已知诃黎勒酸和诃
          浓度分别为418、413 μg/mL的混合对照品溶液。                         子酸含量的诃子粉末 0.05 g，共 6 份，精密称定，分别加
          2.1.3 供试品溶液的制备 取诃子粉末（过四号筛）约                         入相当于样品中各成分含量 100% 的混合对照品溶液，
          0.1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇                       按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色
          50 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率 240 W，频率 40                   谱条件进样分析，记录峰面积并计算加样回收率。结果
          kHz，下同）20 min，放冷，再次称定质量，用 70% 甲醇补                   显示，诃黎勒酸、诃子酸的加样回收率分别为 99.36%
          足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。                              （RSD＝0.55%，n＝6）、99.78%（RSD＝0.83%，n＝6），表
          2.1.4 专属性试验 取上述供试品溶液、混合对照品溶                         明方法准确度良好。
          液和空白溶液（70%甲醇），按“2.1.1”项下色谱条件进样                      2.1.10 样品中 2 种成分的含量测定 取诃子样品，按
          分析，记录色谱图（图 1，空白图略）。结果显示，各待测                        “2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱
          成分的色谱峰与相邻峰分离度均大于 1.5，空白溶液无                          条件进样分析，记录峰面积并按外标一点法计算样品含
          干扰。                                                 量。平行测定3次，取平均值。
          2.1.5 线性关系考察 取“2.1.2”项下混合对照品溶液                      2.2 诃黎勒酸和诃子酸的提取工艺优化
          适量，用甲醇逐级稀释，制得诃黎勒酸质量浓度分别为                            2.2.1 单因素实验 （1）根据本课题组前期研究数据，
          209.0、104.5、52.25、26.13、13.06、6.531、3.266 μg/mL，诃   分别对超声提取、回流提取及常温浸渍等3种提取方式


          · 2734 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 22                            中国药房  2022年第33卷第22期
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