Page 57 - 《中国药房》2022年22期
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要的研究意义。                                            粉碎成粗粉，各取约0.5 g，精密称定，分别置于具塞锥形
              目前，有关赤芍酒制后活性成分及药理作用的变化                         瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称质量后浸泡 4 h，超声（功
          缺乏系统研究，本试验采用超高效液相色谱-四极杆飞                           率250 W，频率40 kHz）处理20 min，放冷，再称质量后用
          行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）技术进行系统的定性定                     甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得赤芍供试品溶液
          量分析，对比赤芍酒制前后化学成分及含量差异；同时                           和酒赤芍供试品溶液，置于4 ℃保存备用。
          以痛经模型大鼠为研究对象，采用酶联免疫吸附测定                            2.2.2 UPLC-Q-TOF-MS 分析条件 色谱条件如下：以
         （enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法检测其       Nano ChromCore 120 C18 （2.1 mm×50 mm，1.8 μm）为色
          子宫组织匀浆中前列腺素 F2α （prostaglandin F2α，PGF2α ）、        谱柱，以乙腈为流动相 A、0.1% 甲酸溶液为流动相 B 进
          孕酮、一氧化氮（nitric oxide，NO）、β-内啡肽的含量，旨                行梯度洗脱（0～5 min，8%A；5～10 min，8%A→15%A；
          在探讨赤芍生品和酒制品镇痛作用的差异，为酒赤芍的                           10～15 min，15%A→22%A；15～20 min，22%A→30%A；
          临床应用提供参考。                                          20～25 min，30%A→60%A；25～30 min，60%A→80%A；
          1 材料                                               30～35 min，80%A→100%A；35～40 min，100%A；40～
          1.1 主要仪器                                           41 min，100%A→8%A；41～50 min，8%A）；流速为 0.3
              本 研 究 所 用 主 要 仪 器 包 括 Q-TOF  SYNAPT  G2        mL/min；柱温为 25 ℃；进样量为 5 μL。质谱条件如下：
                                                             采用正、负离子检测模式，电离源温度为 80 ℃，去溶剂
          HDMS 型 Waters Acquity UPLC 仪（美国 Waters 公司）、
                                                             气温度为 150 ℃；锥孔气和去溶剂气均为氮气，流速分
          JA2603B型千分之一电子天平（上海天美天平仪器有限
                                                             别为 40、500 L/h；毛细管电压为 3.0 kV，锥孔电压为 40
          公司）、FA1004B型万分之一电子天平（上海佑科仪器仪
                                                             V，提取锥孔电压为5.0 V；扫描范围为100～1 000 amu，
          表有限公司）、Multiskan Sky 型全波长酶标仪（美国
                                                             扫描时间为0.2 s。利用甲酸钠建立质量轴标准曲线，以
          Thermo Fisher Scientific 公司）、Legend Micro 型离心机
                                                             亮氨酸脑啡肽进行质量校正以确保质量精度和重现性。
         （德国Eppendorf公司）等。
                                                             使用串联方法进行分析时，使用氩气作碰撞气，低碰撞
          1.2 主要药品与试剂
                                                             能为10 eV，高碰撞能为30 eV。
              赤芍饮片（批号HML20190722-03）购自吉林国安药
                                                             2.2.3  赤 芍 酒 制 前 后 化 学 成 分 的 分 离 鉴 定  应 用
          业有限公司，经长春中医药大学中药鉴定教研室翁丽丽
                                                             UPLC-Q-TOF-MS 技术，按“2.2.2”项下条件对赤芍与酒
          教授鉴定为毛茛科植物芍药P. lactiflora Pall.的干燥根。
                                                             赤芍进行检测，总离子流图（图 1）显示，在正、负离子模
          大鼠 PGF2α、孕酮、β-内啡肽 ELISA 试剂盒（批号均为
                                                             式下，赤芍和酒赤芍中各化学成分的分离度均较好、响
          202106）均购自江苏酶免实业有限公司；NO测定试剂盒
                                                             应均较高。基于UNIFI科学信息系统，结合文献数据和
         （批号A013-2-1）购自南京建成生物工程研究所；苯甲酸
                                                             在线数据库对比，赤芍与酒赤芍在正、负离子模式下均
          雌二醇注射液（批号20210201，规格2 mL∶4 mg）购自宁
                                                             鉴定出 60 个化学成分（表 1），其中，在正离子模式下均
          波第二激素厂；缩宫素（批号20210407，规格2 mL∶10单
                                                             分离鉴定出 6 个化学成分，包括 2 个鞣质类成分，1 个三
          位）购自吉林省华牧动物保健品有限公司；布洛芬缓释
                                                             萜类成分，3个挥发性成分；在负离子模式下均分离鉴定
          胶囊（阳性对照药物，批号2003241，规格0.3 g）购自中美
                                                             出54个化学成分，包括24个单萜及其糖苷类成分，3个三
          天津史克制药有限公司；乌来糖（批号BSF210509）购自
                                                             萜类成分，3个黄酮类成分，1个鞣质类成分，8个酚酸类成
          合肥巴斯夫生物科技有限公司；黄酒购自吉林省大洋酒
                                                             分，3个糖类成分，4个挥发性成分，8个其他类成分。
          业有限公司；水为蒸馏水。                                       2.2.4 赤芍酒制前后化学成分含量差异的分析 按以
          1.3 动物                                             下公式计算“2.2.3”项下鉴定出的 60 个化学成分的炮制
              SPF 级 Wistar 雌性大鼠 42 只，8 周龄，体质量 230～           前后变化指数（表 1），炮制前后的变化指数＝酒赤芍离
          250 g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，实验动物                        子峰面积/对应保留时间的赤芍离子峰面积。该值接近
          生产许可证号为 SCXK（辽）2020-0001。动物实验经长                    1 表示此离子峰对应的化学成分炮制前后含量相近，该
          春中医药大学实验动物伦理委员会批准，批准编号为                            值大于 1 表示此离子峰对应的化学成分炮制后含量增
          2021218。                                           加，该值小于1表示此离子峰对应的化学成分炮制后含
          2 方法与结果                                            量减少 。结果显示，赤芍酒制后，除芳樟醇、peduncula‐
                                                                   [6]
          2.1 酒赤芍的制备                                         gin、丁香酸、sucrose、核糖、1′-O-benzoylsucrose、异水杨
                                    [5]
              参照课题组前期研究工艺 ，取赤芍饮片，加黄酒拌                        苷 7 个成分含量增加以外，其他成分含量均有所降低。
          匀（每 100 g 赤芍用黄酒 14 g），闷润 35 min，再于 120 ℃           炮制后总相对含量[（酒赤芍峰面积－赤芍峰面积）/赤芍
          下炒制20 min，即得酒赤芍。                                   峰面积×100%]增加最多的为糖类成分，增加了10.08%；
          2.2 赤芍酒制前后化学成分的分析                                  总相对含量降低最多的为三萜类成分，降低了 33.02%，
          2.2.1 供试品溶液的制备 将赤芍饮片和酒赤芍饮片                         降低最少的为单萜及其糖苷类成分，降低了11.44%。


          中国药房  2022年第33卷第22期                                              China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 22    · 2739 ·
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