Page 53 - 《中国药房》2022年21期

析，记录峰面积。结果显示，3种色谱柱条件下所得苦杏 照药材具有相同的色谱行为，阴性对照均无干扰。本课
仁苷、黄芩苷、汉黄芩苷和甘草酸铵峰面积的 RSD 均不 题组对处方中的麦冬、苦杏仁也进行了 TLC 鉴别研究，
大于1.0%，表明方法耐用性较好。 但阴性对照一直有干扰，其鉴别方法尚需进一步摸索。
2.3.10 样品含量测定 精密量取 15 批桔贝合剂各 2 3.3 含量测定
mL，置50 mL量瓶中，按“2.3.2（2）”项下方法制备供试品 桔贝合剂的君药桔梗与浙贝母所含主要成分分别
溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积， 为桔梗皂苷与贝母素类生物碱，因其无紫外吸收，须使
按外标法计算样品中苦杏仁苷、黄芩苷、汉黄芩苷和甘 用蒸发光散射检测器（ELSD），本课题组也建立了其含
草酸铵的含量，平行测定2次，结果见表2。 量测定方法，但因该方法已有文献报道 [4，12] ，故本文不再
表2 桔贝合剂中苦杏仁苷等4种待测成分的含量测定 赘述。苦杏仁苷为臣药苦杏仁的主要功效成分 ，黄芩
[13]
结果（n＝2，mg/mL） 苷与汉黄芩苷均为臣药黄芩的主要功效成分 ；甘草的
[14]
[15]
公司 批号 苦杏仁苷 黄芩苷 汉黄芩苷 甘草酸铵 主要功效成分为甘草酸铵与甘草苷 ，但研究发现桔贝
A公司 190203 未检出 1.40 0.42 0.14 合剂中甘草酸铵含量较高、甘草苷含量较低，故本研究
190207 未检出 1.43 0.41 0.18
190208 未检出 1.45 0.42 0.18 建立了同时测定桔贝合剂中苦杏仁苷、黄芩苷、汉黄芩
190209 未检出 1.47 0.43 0.19 苷和甘草酸铵含量的HPLC法。另外，本课题组也设计
190301 未检出 0.51 0.20 0.05 了采用 ELSD 同时测定桔梗皂苷 D、贝母素甲、贝母素
B公司 23190071 0.03 4.99 1.06 0.62
23190251 0.03 5.20 1.09 0.57 乙、苦杏仁苷、黄芩苷、汉黄芩苷、甘草酸铵的方法，但因
23190441 0.03 6.18 1.45 0.56 样品中黄芩苷含量较其他成分高出太多，致使 ELSD 色
23210231 0.14 4.61 1.01 0.35 谱图中黄芩苷色谱峰过大，其余色谱峰过小，故不适合
23210241 0.14 4.39 0.96 0.34
C公司 18090051 2.77 5.16 1.01 0.24 同时测定这7种成分。因此，本课题组采用二极管阵列
19040013 2.82 4.79 0.89 0.36 检测器（DAD），并在不同时间点切换检测波长，以避开
19040024 2.63 5.05 1.06 0.29 黄芩苷类成分在272 nm波长处的最大吸收，而采用其波
19090030 2.85 5.39 1.01 0.37
20010001 2.74 4.54 0.85 0.38 谷 252 nm 作为检测波长；通过 DAD 扫描确定苦杏仁苷
的最大吸收波长为210 nm、甘草酸铵的最大吸收波长为
3 讨论
252 nm，最终确定本研究的检测条件为：0～20 min 时，
3.1 苦杏仁水的化学反应
检测波长为210 nm；20～95 min时，检测波长为252 nm。
苦杏仁作为方中臣药，具有降气、止咳、平喘的作
本研究还对柱温（25、30、40 ℃）进行了考察，发现在固定
用。桔贝合剂的部颁标准【制法】项下要求“苦杏仁压去
色谱柱、pH及流动相等其他条件不变的情况下，30 ℃的
脂肪油后，加水蒸馏制取苦杏仁水”。经查阅文献，苦杏
柱温可使色谱峰的分离度更好、保留时间更为合适，且
仁经水蒸馏后主要提取出来的成分是杏仁腈，而杏仁腈
为苦杏仁苷酶解掉2分子糖后的产物，因其不稳定，会水 能改善拖尾现象。
解生成苯甲醛与氢氰酸，故最终苦杏仁水的蒸馏产物只 在供试品溶液的制备中，本课题组分别考察了不同
[10]
有苯甲醛与氢氰酸 。本课题组在前期试验中也验证 提取方法（稀释振摇与超声处理）、不同提取溶剂（甲醇、
了该结论。已知氢氰酸在碳酸钠作用下与三硝基苯酚 50%甲醇、70%甲醇）的提取效果。结果发现，以甲醇作
[11]
反应会生成砖红色的异氰紫酸钠 ，故通过该化学反应 为溶剂，采用稀释振摇的方法，样品提取较为完全，且该
方法更简单。针对流动相，本课题组分别考察了甲醇-
可以证明样品中含有苦杏仁水。若有企业未按照部颁
标准的【制法】要求，将苦杏仁不提取杏仁水而直接与其 水、甲醇-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶
他药材进行煎煮，这样所得的样品则不含氢氰酸，使三 液梯度洗脱的效果，发现苦杏仁苷、黄芩苷、汉黄芩苷和
硝基苯酚试纸不显色。同样，因氢氰酸具有挥发性，桔 甘草酸铵通过甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱后的峰形最
贝合剂的储存应注意包材的密封性，否则很容易造成三 佳、分离度最好。本含量测定结果显示，A 公司所生产
硝基苯酚试纸不显色。本研究通过对 3 家生产企业 15 样品中的苦杏仁苷、黄芩苷、汉黄芩苷、甘草酸铵含量普
批样品进行检测，发现 A 公司近生产日期样品显色明 遍较 B、C 公司样品低很多，特别是苦杏仁苷未检出，可
显，但 1 年后该样品即不能显色，而 B、C 公司不同批号 见各公司因生产工艺参数控制差异较大或使用药材质
的样品均能显色，提示药企应重视样品包材的密封性。 量差异较大，导致现行标准可控性差。
3.2 TLC鉴别 4 结语
桔贝合剂处方药味较多，化学成分丰富，若只用单 本研究所建立的苦杏仁水化学反应方法准确可靠，
个对照品作为对照，则无法显示处方中所有药材的整体 可证明企业是否按部颁标准工艺提取苦杏仁水；建立的
信息，故本研究选择各对照药材对处方中桔梗、浙贝母、 桔梗、浙贝母、黄芩、枇杷叶、甘草的 TLC 鉴别法专属性
黄芩、枇杷叶、甘草进行质量控制，结果显示供试品与对 强，对处方君臣佐使药味均进行了定性控制；建立的同

中国药房 2022年第33卷第21期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 21 ·2607·