Page 25 - 《中国药房》2022年21期

proliferation，among which compound 2 displayed the strongest inhibitory activity against MCF-7，A549 and HepG2 cells，and
their IC50 values were 25.00，22.34 and 12.50 μmol/L respectively；only compound 3 showed stronger inhibitory activity against
K562 cell with IC50 of 28.41 μmol/L. CONCLUSIONS Among them，compounds 10 to 13 are isolated from genus Clerodendrum
for the first time，compounds 4，5，14 were isolated from C. trichotomum for the first time. The abietane diterpenoids（compounds
1-3）have better inhibitory activities against above four tumor cell lines.
KEYWORDS Clerodendrum trichotomum；stem；n-butanol fraction；chemical constituents；structural identification；antitumor
activities

海州常山 Clerodendrum trichotomum Thunb. 属于马 标本存放于贵州医科大学民族药中药开发应用教育部
鞭草科大青属多年生落叶灌木或小乔木，始载于《图经 研究工程中心实验室。
本草》，且在《本草纲目拾遗》《中国药用植物志》《中华本 提取分离实验用到的主要耗材有 Toyopearl HW-
草》《中药大辞典》等著作中均有记载。海州常山株高 40F型大孔树脂、ODS反相材料（日本Tosoh公司），薄层
1.5～10 m，又名后庭花、矮桐子、臭梧桐、香楸、追骨风 色谱（TLC）、柱色谱硅胶以及硅胶薄层层析板（中国青
[1]
等。海州常山根、茎、叶、花和果实均可入药 ，广泛分布 岛海洋化工有限公司），羟丙基葡聚糖凝胶 Sephadex
于我国的中南、西南、华东、华北各省，且在日本、朝鲜以 LH-20（瑞典 GE Healthcare 公司），MCI 填料（日本 Mit‐
[2]
及菲律宾北部也有分布。其味苦、微辛，性平 ，具有祛 subishi Chemical 公司），D101 型大孔树脂（天津市海光
风除湿、解毒杀虫、平肝降压的功效，多用于治疗风湿痹 化工有限公司）；甲醇、丙酮、二氯甲烷、石油醚等试剂均
[3]
痛、高血压、哮喘、偏头痛、疟疾、痢疾等疾病 。海州常 为分析纯。
山的化学成分类型主要有萜类、苯丙素类、黄酮类和甾 体外抗肿瘤活性实验用到的主要试剂有盐酸阿霉
体化合物等，具有抗炎、镇痛、降压、抗病毒、抗肿瘤和抗 素（批号 SB8020，纯度 99%）、青链霉素混合液（批号
[11]
氧化等生物活性 [4―10] 。Nagao 等 研究了海州常山茎和 20210119）、二甲基亚砜（北京索莱宝科技有限公司），胎
叶的甲醇提取物的抗肿瘤活性，发现海州常山茎中抗肿 牛血清（浙江天杭生物科技股份有限公司），MTT 试剂
瘤活性成分（acteoside 和 isoacteoside）的含量比叶高。 （美国 Sigma 公司，批号 9170051），DMEM 高糖培养基、
本课题组前期研究发现，海州常山茎85%乙醇提取物的 0.25%胰蛋白酶（美国Gibco公司）。
出膏率较高且具有较好的抗肿瘤活性，并且本课题组前 1.3 细胞株
期对该提取物的乙酸乙酯部位进行了系统的化学成分 人白细胞K562、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞
研究，分离得到的部分化合物具有良好的抗肿瘤活 A549和人肝癌细胞HepG2均由贵州医科大学省部共建
性 [12―14] 。本研究拟在前期研究基础上，继续对海州常山 药用植物功效与利用国家重点实验室提供。
茎85%乙醇提取物的正丁醇部位进行分离纯化，并采用 2 方法与结果
MTT 法考察分离所得化合物对 4 种人源肿瘤细胞 2.1 细胞培养
（K562、MCF-7、A549 和 HepG2）的增殖抑制活性，为进 将4种细胞分别接种在含10%胎牛血清和1%双抗
一步阐明海州常山茎的抗肿瘤活性物质基础及后续相 （含青霉素和链霉素）的 DMEM 完全培养基中，置于
关研究提供依据。 37 ℃、5%CO2培养箱中培养，每隔 1 天换液 1 次。当细
1 材料 胞增殖到80%～90%时进行传代，选用对数生长期的细
1.1 主要仪器 胞用于实验。
本研究所用的主要仪器有 JEOL-ECS400 型核磁共 2.2 海州常山茎化学成分的提取与分离
振波谱仪（日本 JEOL 公司）、QTOF 型质谱仪（美国 Agi‐ 称取干燥的海州常山茎 15 kg，铡片，粉碎，以 85%
lent公司）、N-1300D-WB型旋转蒸发仪[埃朗科技国际贸 乙醇加热回流提取3次（每次50 L，提取3 h）。合并提取
易（上海）有限公司]、HH.CP-01型CO2培养箱（上海申贤 液，减压浓缩成浸膏（出膏率 15%）。将浸膏用水分散
恒温设备厂）、Mettler EL204型电子天平[梅特勒托利多 后，用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，浓缩后分别
科技（中国）有限公司]、L530型高速离心机（湖南湘仪实 得到石油醚部位50 g、乙酸乙酯部位70 g和正丁醇部位
验室仪器开发有限公司）、通用 680 型酶标仪（美国 Bio 470 g。取正丁醇部位 470 g，用 D101 大孔树脂吸附，依
Tek公司）、TS-100型倒置显微镜（日本Nikon公司）。 次用水和30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇梯度洗脱，分别
1.2 主要药品与试剂 得到水段、30% 乙醇段（116 g）、60% 乙醇段（80 g）和
实验用海州常山茎于2016年11月采自江苏省南京 95% 乙醇段（10 g）洗脱物。取 95% 乙醇段洗脱物，经反
市，经江苏省中国科学院植物研究所姚淦研究员鉴定为 复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20 柱色谱以及结晶、重结
马鞭草科大青属植物海州常山 C. trichotomum Thunb.， 晶等方法处理，从中分离得到化合物1（3 mg）、化合物2

中国药房 2022年第33卷第21期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 21 ·2579·