Page 20 - 《中国药房》2022年21期

2.4.2 尿液供试品溶液的制备 取各时间段尿液样品 个化合物。通过将龙眼叶乙醇提取物色谱图与给药组、
混合均匀，在37 ℃下吹氮气浓缩至2 mL。加2 mL甲醇 空白对照组大鼠粪便和尿液样品色谱图进行比对，共发
沉淀蛋白，离心，取1 mL上清液吹干，加400 μL 0.1%甲 现2个原型成分（峰1、2），其余6个为代谢产物（峰M1～
M6）。通过进一步比较空白对照组和给药组大鼠粪便
酸-乙腈溶液复溶后，离心，取上清液，过0.22 µm微孔滤
和尿液样品的色谱图，从给药组大鼠粪便样品中初步鉴
膜，收集滤液，即为尿液供试品溶液。
定出了3个化合物（包括2个原型成分和1个代谢产物），
2.5 色谱与质谱条件
从大鼠尿液样品中初步鉴定出了5个化合物（均为代谢
2.5.1 色谱条件 采用 ACQUITY UPLC HSS T3 色谱
产物），结果见表1。
柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），以乙腈（A）-0.1% 甲酸
100 1
溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～8 min，10%A→ 2
相对丰度/%
55%A；8～12 min，55%A→63%A；12～14 min，63%A→ 4
67%A；14～16 min，67%A→70%A；16～17 min，70%A→ 3
0
80%A；17～18 min，80%A→90%A；18～18.5 min， 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
t/min
90%A→100%A；18.5～19 min，100%A→10%A；19～ A.龙眼叶提取物
100
20 min，10%A）；流速为 0.3 mL/min；柱温为 35 ℃；进样
量为 4 μL。 相对丰度/%
2.5.2 质 谱 条 件 采 用 电 喷 雾 离 子 源（electrospray
0
ionization，ESI），选择正离子模式进行检测，离子源温度 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
t/min
为140 ℃；毛细管电压为3.0 kV，锥孔电压为40 V；脱溶 B.空白对照组尿液
M3 M5
剂电压为 80 V，脱溶剂气温度为 400 ℃，脱溶剂气流量 100
为 800 L/h；锥孔气流量为 50 L/h；扫描范围为质荷比 相对丰度/% M1 M2 M6
（m/z）50～1 200。
0
2.6 样品分析 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
t/min
取龙眼叶乙醇提取物、粪便供试品溶液、尿液供试 C.给药组尿液
品溶液，分别按“2.5”项下色谱与质谱条件进样检测。采 100
用Masslynx v4.1数据处理软件对实验数据进行分析，得 相对丰度/%
到化合物的精确相对分子量、分子式及碎片信息。利用
得到的目标化合物的一级、二级碎片离子信息与仪器自 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
带的数据库及谱库进行匹配，并通过与对照品图谱和国 t/min
D.空白对照组粪便
内外相关文献资料进行比对，对化合物进行推测和 100
鉴定。 相对丰度/%
3 结果 1 2 M4 M7
0 M8
3.1 龙眼叶乙醇提取物在大鼠体内的主要代谢产物分析 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
t/min
在正离子检测模式下获得的各样品的基峰色谱图 E.给药组粪便
见图1。结果显示，从大鼠粪便和尿液样品中共鉴定出8 图1 正离子模式下各样品的基峰色谱图
表1 龙眼叶乙醇提取物在大鼠体内的主要代谢产物分析结果

峰号 t R/min [M+H] m/z 误差/ppm 主要的二级碎片离子m/z 分子式 来源 鉴定成分 化合物类型
+
1 4.13 303.050 4 －0.3 229.049 7、153.019 0 C 15H 11O 7 龙眼叶乙醇提取物、粪便 槲皮素 [5―6] 原型成分
2 4.64 287.055 8 －1.0 213.055 4、153.019 3 C 15H 11O 6 龙眼叶乙醇提取物、粪便 木犀草素 [7] 原型成分
M1 3.11 431.090 7 0.2 255.065 8、199.074 5、149.022 2 C 21H 19O 10 尿液 木犀草素或山柰酚脱氧后葡萄糖醛酸化产物 [8] 代谢产物
M2 4.38 493.099 0 1.6 403.130 0、317.066 9、220.139 2、182.774 5 C 22H 21O 13 尿液 槲皮素甲基化后葡萄糖醛酸化产物 [9] 代谢产物
M3 5.34 255.066 2 2.0 227.071 0、199.075 7、181.065 9、137.024 4、133.028 9 C 15H 11O 4 尿液 木犀草素或山柰酚脱氧产物 [8] 代谢产物
M4 5.67 303.050 5 0.0 285.042 5、257.045 3、229.050 3、201.056 0、173.059 4、165.019 1、153.018 6、137.024 5 C 15H 11O 7 粪便 木犀草素氧化产物 [10] 代谢产物
M5 6.50 271.060 8 0.7 243.065 8、215.070 8、197.061 9、169.062 4、153.018 9、149.024 7 C 15H 11O 5 尿液 槲皮素脱氧产物 [11] 代谢产物
M6 6.79 317.066 4 0.9 302.041 3、285.039 9、274.044 5、229.047 1、201.057 1、165.020 9、153.019 5、139.041 5 C 16H 13O 7 尿液 槲皮素甲基化产物 [9] 代谢产物

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