Page 19 - 《中国药房》2022年21期

RESULTS A total of eight compounds were identified in urine and feces of rats，including 2 prototype components and 6
metabolites. Three compounds （including two prototype components as quercetin，luteolin and one metabolite as luteolin or
kaempferol） in feces of rats were identified；five compounds （all metabolites） in urine of rats were identified，involving
metabolites of quercetin，luteolin or kaempferol. Metabolites mainly included the products of methylation，glucuronidation and
oxidation. CONCLUSIONS After intragastric administration， the ethanol extract from the leaves of D. longan is mainly
metabolized in rats through methylation，glucuronidation and other pathways. The identified compounds are mostly metabolites of
quercetin and luteolin.
KEYWORDS Leaves of Dimocarpus longan；ethanol extract；UPLC-Q-TOF-MS/MS；feces；urine；metabolites

龙眼叶是无患子科龙眼属植物龙眼 Dimocarpus 动物有限公司，动物生产合格证号为 SCXK（湘）2019-
longan Lour. 的叶或嫩芽，味甘淡、性平，具有发表清热、 0004。将大鼠饲养于温度（23±2）℃、相对湿度（55±
[1]
解毒、燥湿等功效，主要用于治疗发热、湿疹、肠炎等 。 10）%的动物房中，饲养期间自由饮水、进食。本动物实
在广西崇左和贺州等地，龙眼叶一直被作为民间中草药 验方案经广西中医药大学伦理委员会批准（批准号为
使用，常以单方形式用于治疗糖尿病。本课题组前期已 20220110-035）。
经对龙眼叶不同极性部位的药理活性进行了筛选，发现 2 方法
[2]
龙眼叶乙醇提取物具有一定的降血糖作用 。此外，本 2.1 龙眼叶乙醇提取物与混合对照品溶液的制备
课题组前期对龙眼叶的血清药物化学进行了研究，在大 2.1.1 龙眼叶乙醇提取物的制备 取龙眼叶粗粉1 500
[3]
鼠血清样品中发现了槲皮素和木犀草素等原型成分 ， g，依次加 6 倍量（mL/g）95% 乙醇和 50% 乙醇加热回流
但未对给药后的动物尿液及粪便样品进行分析。为了 提取，每次 2 h，合并滤液。回收乙醇后，将提取液干燥
更加系统地对龙眼叶乙醇活性部位进入到体内的代谢 浓缩至无醇味，即得乙醇提取物浸膏（得膏率约为
情况进行分析，本研究利用超高效液相色谱-串联四极 15%），于 4 ℃下保存，备用。临用时，用甲醇溶解，过
杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术，对大鼠 0.22 μm微孔滤膜，取上清液进样分析。
给予龙眼叶乙醇提取物后尿液及粪便样品进行检测，分 2.1.2 混合对照品溶液的制备 取山柰酚、木犀草素、
析其原型成分及可能的代谢产物，并为进一步阐明龙眼 槲皮素对照品各适量，置于同一 10 mL 棕色量瓶中，加
叶降血糖的作用机制提供科学依据。 甲醇溶解并定容，即得。
1 材料 2.2 动物分组与给药
1.1 主要仪器 将大鼠适应性饲养1周后，按体质量随机分为2组：
本研究所用的主要仪器有：ACQUITY UPLC Ⅰ- 龙眼叶乙醇提取物给药组（后文简称“给药组”）和空白
Class型UPLC仪、Xevo G2-Q-TOF四极杆飞行时间质谱 对照组，每组3只。给药组大鼠在实验前禁食不禁水12
仪（美国Waters公司），SQP型万分之一电子分析天平[赛 h，然后灌胃龙眼叶乙醇提取物33.8 g/kg（以提取物计，1/
多利斯科学仪器（北京）有限公司]，Milli-Q synergy型超 3最大耐受剂量），每天2次，连续给药3 d ；空白对照组
[4]
纯水仪（美国 Millipore 公司），CT15RE 型高速冷冻离心 大鼠同步灌胃等体积生理盐水。
机（日立工机株式会社），ND100-1 型氮气吹扫仪（上海 2.3 粪便和尿液样品采集与处理
析维医疗科技有限公司）。 分别收集给药后 0～72 h 的大鼠粪便和给药后 0～
1.2 主要药材与试剂 48 h的大鼠尿液，每12 h收集1次。将粪便样品在50 ℃
龙眼叶药材于 2019 年 11 月采自广西贺州，经广西 下烘干，碾碎。将尿液样品以 2 500 r/min 离心 5 min 后
中医药大学药学院滕建北教授鉴定为无患子科植物龙 取上清液。随后将粪便和尿液样品置于－80 ℃下保存，
眼 D. longan Lour. 的叶；山柰酚对照品、木犀草素对照 备用。
品、槲皮素对照品（批号分别为 RP200312、RP190505、 2.4 粪便和尿液供试品溶液的制备
RP200917，纯度均不低于 98%）均购自成都麦德生科技 2.4.1 粪便供试品溶液的制备 将各时间段的粪便样
有限公司；甲醇、乙腈、甲酸为质谱纯，其他试剂均为分 品混合均匀后，取 0.3 g 粪便粉末，加入 1.5 mL 甲醇，涡
析纯，水为超纯水。 旋振荡 2 min，超声（功率 250 W，频率 50 kHz）提取 30
1.3 动物 min 后，在4 ℃下以13 000 r/min离心10 min（下同），取上
本研究所用动物为健康清洁级Wistar大鼠，共6只， 清液，过 0.22 µm 微孔滤膜，收集滤液，即为粪便供试品
雄性，体质量为（200±20）g，购自湖南斯莱克景达实验 溶液。

中国药房 2022年第33卷第21期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 21 ·2573·