Page 45 - 《中国药房》2022年20期

紫花地丁总香豆素提取工艺优化及其抗氧化和抗肿瘤活性考察 Δ

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陈仁强 1，2＊ ，刘 桢 ，胡慧玲 ，李林锋 ，张 春 （1.西南医科大学药学院，四川 泸州 646000；2.西南医科大学
附属医院药学部，四川 泸州 646000）
中图分类号 R965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）20-2471-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.20.08

摘 要 目的 优化紫花地丁总香豆素的提取工艺，并评价其纯化物的体外抗氧化活性和抗肿瘤活性。方法 在单因素实验的基
础上，以紫花地丁总香豆素得率为响应值，以液料比、提取时间、乙醇体积分数为变量，采用响应面法优化紫花地丁总香豆素的提
取工艺并验证。采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法、2，2′-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）法和2-苯基-
4，4，5，5-四甲基咪唑啉-3-氧代-1-氧（PTIO）法评价紫花地丁总香豆素纯化物的抗氧化活性。采用CCK-8法检测其对人宫颈癌细
胞HeLa、人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810、人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人非小细胞肺癌细胞A549的抑
制作用；采用Hoechst 33258染色法检测其对HCCC-9810细胞凋亡形态的影响，并测定细胞中乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化
酶（SOD）含量。结果 最优提取工艺为液料比25∶1（mL/g）、提取时间1.9 h、乙醇体积分数68%；3次验证实验的紫花地丁总香豆素
平均得率为（21.10±0.17）mg/g，RSD 为 0.80%（n＝3），与预测值（20.79 mg/g）的相对误差为 1.49%。紫花地丁总香豆素纯化物对
DPPH和ABTS自由基的半数抑制浓度（IC50 ）分别为21.54、17.11 μg/mL，略高于抗坏血酸的15.21、12.45 μg/mL；对PTIO自由基的
IC50为1 422.01 μg/mL，远高于抗坏血酸的37.20 μg/mL；对上述 5 种细胞的 IC50分别为（113.18±15.97）、（51.17±1.72）、（134.15±
11.75）、（171.83±15.27）、（93.38±4.65）μg/mL；能促进 HCCC-9810 细胞凋亡，增加其 LDH 含量并降低 SOD 含量。结论 成功优
化了紫花地丁总香豆素的提取工艺；所得提取物的纯化物具有抗氧化活性和抗肿瘤活性。
关键词 紫花地丁；总香豆素；提取工艺；抗氧化作用；抗肿瘤作用

Optimization of the extraction technology of total coumarin from Viola yedoensis and its antioxidant and
anti-tumor activities
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1，2
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CHEN Renqiang ，LIU Zhen ，HU Huiling ，LI Linfeng ，ZHANG Chun（1. School of Pharmacy，Southwest
1
Medical University，Sichuan Luzhou 646000，China；2. Dept. of Pharmacy，the Affiliated Hospital of Southwest
Medical University，Sichuan Luzhou 646000，China）
ABSTRACT OBJECTIVE To optimize the extraction technology of total coumarin from Viola yedoensis and to evaluate its in
vitro antioxidant and anti-tumor activities of its purified product. METHODS On the basis of single factor experiments，the
extraction technology of total coumarin from V. yedoensis was optimized by the response surface methodology，using yield of total
coumarin from V. yedoensis as response value，solid-liquid ratio，extraction time and ethanol volume fraction as variables. The
verification tests were conducted. The antioxidant activity of purified product of total coumarin from V. yedoensis was evaluated by
1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH） method，2，2′-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic） acid ammonium salt （ABTS）
method and 2-phenyl-4，4，5，5-tetramethylimidazoline-3-oxide-1-oxyl （PTIO） method. CCK-8 assay was used to determine the
inhibitory effect of it on human cervical cancer cells HeLa，human intrahepatic bile duct cancer cells HCCC-9810，human
hepatocellular carcinoma cells HepG2，human breast cancer cells MDA-MB-231 and human non-small cell lung cancer cells A549.
The apoptosis morphology of HCCC-9810 cells was detected by Hoechst 33258 staining，and lactate dehydrogenase（LDH）and
superoxide dismutase（SOD）content were determined. RESULTS The optimal extraction technology included solid-liquid ratio was
25∶1（mL/g），extraction time was 1.9 h，ethanol volume fraction was 68%. Average yield of total coumarin from V. yedoensis was
（21.10±0.17）mg/g，and RSD was 0.80%（n＝3），relative error of which with predicted value（20.79 mg/g）was 1.49%. The
median inhibitory concentrations（IC50 ）of purified product of total coumarin from V. yedoensis to DPPH and ABTS free radicals
were 21.54 and 17.11 μg/mL，which were slightly higher than that of ascorbic acid（15.21，12.45 μg/mL）. The IC50 to PTIO free
radicals was 1 422.01 μg/mL，which was far higher the that of
Δ 基金项目 四川省科技计划项目（No.2021YJ0114）；泸州市人民 ascorbic acid （37.20 μg/mL）. The IC50 values of total
政府-西南医科大学科技战略合作项目（No.2019LZXNYDJ49）
coumarin from V. yedoensis to above 5 cells were（113.18±
＊第一作者 硕士研究生。研究方向：天然药物活性与中药药理。
E-mail：renqiangchen@126.com 15.97），（51.17±1.72），（134.15±11.75），（171.83±15.27）
# 通信作者 教授，硕士生导师，博士。研究方向：分子生药学与中 and （93.38±4.65）μg/mL，respectively. Total coumarin from
药药理。E-mail：zc83good@126.com V. yedoensis induced the apoptosis of HCCC-9810 cells and

中国药房 2022年第33卷第20期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 ·2471·