Page 48 - 《中国药房》2022年20期
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（ mg/g ） 21.0 2.50 紫花地丁总香豆素得率/（mg/g） 100 100
20.7
20.4
紫花地丁总香豆素得率/ 19.6 B/h 2.10 DPPH自由基清除率/％ 50 0 抗坏血酸 ABTS自由基清除率/％ 50 0 抗坏血酸
2.30
20.1
19.9
紫花地丁总香豆素
19.3
紫花地丁总香豆素
1.90
纯化物
纯化物
19.0
1.70
100
200
100
200
22∶1
26∶1 1.90 2.30 1.50 0 紫花地丁总香豆素/（μg/mL） 300 0 紫花地丁总香豆素/（μg/mL） 300
30∶1 1.50 20∶1 22∶1 24∶1 26∶1 28∶1 30∶1 A. DPPH自由基清除率 B. ABTS自由基清除率
B/h
A/ （ mL/g ）
A/（mL/g） 100
A. A与B交互作用的响应面图 B. A与B交互作用的等高线图 抗坏血酸
（ mg/g ） 21.0 75.00 紫花地丁总香豆素得率/（mg/g） PTIO自由基清除率/％ 50 紫花地丁总香豆素
20.4
纯化物
19.9
紫花地丁总香豆素得率/ 18.7 C/% 65.00 0 0 紫花地丁总香豆素/（μg/mL） 300
70.00
19.3
18.1
100
200
17.6
17.0
60.00
C. PTIO自由基清除率
75.00
65.00 55.00 1.50 1.90 2.30 55.00 1.50 1.70 1.90 2.10 2.30 2.50 图3 紫花地丁总香豆素纯化物对 DPPH、ABTS 和
C/% B/h B/h PTIO自由基的清除情况
C. B与C交互作用的响应面图 D. B与C交互作用的等高线图 得ABTS储备液。将上述储备液用50%乙醇稀释后，得
（ mg/g ） 21.0 75.00 紫花地丁总香豆素得率/（mg/g） ABTS 工作液（在 734 nm 处的吸光度宜为 0.70±0.02）。
20.5
20.0
紫花地丁总香豆素得率/ 18.5 C/% 65.00 4、8、16、24、32、64、128、256 μg/mL，以相同质量浓度的
70.00
19.5
将紫花地丁总香豆素纯化物用 50% 乙醇溶解并稀释至
19.0
18.0
抗坏血酸作为阳性对照，分别吸取上述待测液40 μL于
17.5
60.00
75.00
65.00 55.00 20∶1 24∶1 28∶1 55.00 20∶1 22∶1 24∶1 26∶1 28∶1 30∶1 96 孔板中，再加入 ATBS 工作液或 50% 乙醇 160 μL，摇
C/% A/ （ mL/g ） A/（mL/g） 匀，避光反应 8 min，于 734 nm 处测定各孔的吸光度，按
E. A与C交互作用的响应面图 F. A与C交互作用的等高线图 下式计算 ABTS 自由基清除率：ABTS 自由基清除率＝
图2 因素 A、B、C 交互作用对紫花地丁总香豆素得率 [A0－（A1－A2 ）]/A0×100%（式中，A0为 50% 乙醇 40 μL+
影响的响应面和等高线图 ABTS 工作液 160 μL 的吸光度，A1 为待测液 40 μL+
2.4 紫花地丁总香豆素抗氧化活性的评价 ABTS溶液160 μL的吸光度，A2为待测液40 μL+50%乙
[10]
2.4.1 DPPH 自由基清除率 参照相关文献的方法 ， 醇 160 μL 的吸光度）。实验重复 3 次。结果（图 3B）显
称取 DPPH 8.00 mg，加一定量 95% 乙醇超声溶解并稀 示，与抗坏血酸比较，紫花地丁总香豆素纯化物对
释，制成浓度为 0.2 mmol/L 的 DPPH 溶液。分别吸取 ABTS 自由基的清除能力稍弱，紫花地丁总香豆素纯化
95% 乙醇 100 μL 和 DPPH 溶液 100 μL 于 96 孔板中，避 物 和 抗 坏 血 酸 对 ABTS 自 由 基 的 IC50 分 别 为 17.11、
光反应30 min，于517 nm处测定各孔的吸光度。将紫花 12.45 μg/mL。
[12]
地丁香豆素纯化物用 95% 乙醇溶解并稀释至 4、8、16、 2.4.3 PTIO自由基清除率 参照相关文献的方法 ，称
32、64、128、256 μg/mL，以相同质量浓度的抗坏血酸作 取PTIO 7.50 mg，溶于磷酸盐缓冲液（pH7.4，下同）15 mL
为阳性对照，分别吸取上述待测液100 μL于96孔板中， 中，得质量浓度为0.5 mg/mL的PTIO溶液。将紫花地丁
再加入的DPPH溶液或95%乙醇100 μL混合，避光反应 总香豆素纯化物用磷酸盐缓冲液溶解并稀释至4、8、16、
30 min，于 517 nm 处测定各孔的吸光度，按下式计算 32、64、128、256 μg/mL，以相同质量浓度的抗坏血酸作
DPPH自由基清除率：DPPH自由基清除率＝[A0－（A1－ 为阳性对照，分别吸取上述待测液 40 μL 于 96 孔板中，
A2 ）]/A0×100%（式中，A0为 95% 乙醇+DPPH 溶液的吸光 再加入PTIO溶液或磷酸盐缓冲液160 μL，摇匀，避光反
度，A1为待测液+DPPH溶液的吸光度，A2为待测液+95% 应 2 h，于 557 nm 处测定各孔的吸光度值，按下式计算
乙醇的吸光度）。实验重复 3 次。结果（图 3A）显示，与 PTIO 自由基清除率：PTIO 自由基清除率＝[A0－（A1－
抗坏血酸比较，紫花地丁总香豆素纯化物对DPPH自由 A2 ）]/A0×100%（式中，A0为磷酸盐缓冲液40 μL+PTIO溶
基的清除能力稍弱；紫花地丁总香豆素纯化物和抗坏血 液 160 μL 的吸光度，A1为待测液 40 μL+PTIO 溶液 160
酸对 DPPH 自由基的半数抑制浓度（IC50 ）分别为 21.54、 μL 的吸光度，A2为待测液 40 μL+磷酸盐缓冲液 160 μL
15.21 μg/mL。 的吸光度）。实验重复 3 次。结果（图 3C）显示，与抗坏
[11]
2.4.2 ABTS自由基清除率 在相关文献方法 的基础 血酸比较，紫花地丁总香豆素纯化物对 PTIO 自由基的
上 稍 做 改 进 ，取 7.4 mmol/L 的 ABTS 乙 醇 溶 液 、2.6 清除能力较弱，紫花地丁总香豆素纯化物和抗坏血酸对
mmol/L的过硫酸钾溶液各2 mL，混合后，避光放置16 h， PTIO自由基的IC50分别为1 422.01、37.20 μg/mL。
·2474· China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 中国药房 2022年第33卷第20期
