Page 47 - 《中国药房》2022年20期

比为20∶1，提取2次，考察不同提取时间（1、1.5、2、2.5、3 h） 表2 紫花地丁总香豆素提取工艺优化响应面实验的设
对紫花地丁总香豆素得率的影响；设置液料比为 10∶1， 计与结果
提取时间为 1 h，提取 2 次，考察不同乙醇体积分数 序号 A/（mL/g） B/h C/% Y/（mg/g）
1 25∶1 1.5 55 18.99
（35%、45%、55%、65%、75%）对紫花地丁总香豆素得率
2 25∶1 2 65 20.71
的影响。结果见图1。 3 4 20∶1 1.5 65 19.83
2
55
17.66
30∶1
21.0
（ mg/g ） 22 （ mg/g ） 20.5 （ mg/g ） 20 5 6 25∶1 1.5 75 20.10
18
55
18.69
20∶1
16
2
20
总香豆素得率/ 18 总香豆素得率/ 20.0 总香豆素得率/ 12 7 8 9 25∶1 2.5 65 20.37
14
2
2
65
25∶1
20.98
10
55
17.85
25∶1
16
0 20∶1 40∶1 19.5 0 1 2 3 4 8 0 20 40 60 80 10 20∶1 2 75 19.30
液料比/（mL/g） 提取时间/h 乙醇体积分数/% 11 25∶1 2.5 75 19.64
A.液料比的影响 B.提取时间的影响 C.乙醇体积分数的影响
12 25∶1 2 65 20.52
图1 液料比、提取时间、乙醇体积分数对紫花地丁总香 13 30∶1 2.5 65 19.26
豆素得率的影响 14 20∶1 2.5 65 20.56
15 30∶1 1.5 65 19.76
由图 1A 可知，在液料比从 15∶1 升至 25∶1 的过程 16 25∶1 2 65 20.67
中，紫花地丁总香豆素得率逐渐增加；当继续增加液料 17 30∶1 2 75 20.43
比，其得率反而降低。当液料比为25∶1时，紫花地丁总 表3 紫花地丁总香豆素提取工艺优化响应面实验的方
香豆素得率最高（20.79 mg/g）。由图1B可知，在提取时 差分析结果
间从1 h延长至2 h的过程中，紫花地丁总香豆素得率逐 方差来源 平方和 自由度 均方 F P
渐升高，并在 2 h 时达到最大值（20.91 mg/g）；当提取时 模型 14.72 9 1.64 12.30 0.001 6
A 0.20 1 0.20 1.52 0.257 9
间超过2 h后，其得率急剧下降，可能与提取时间过长会
B 0.24 1 0.24 1.77 0.224 5
导致某些热稳定性较差的香豆素遭到破坏降解有关。 C 4.94 1 4.94 37.16 0.000 5
由图1C可知，随着乙醇体积分数的逐渐增加，紫花地丁 AB 0.37 1 0.37 2.80 0.137 9
AC 1.17 1 1.17 8.81 0.020 8
总香豆素得率呈先急剧上升后缓慢下降的趋势；当乙醇
BC 0.12 1 0.12 0.89 0.377 5
体积分数为65%时，紫花地丁总香豆素得率最高（17.82 A 2 0.90 1 0.90 6.76 0.035 4
mg/g）。 B 2 0.47 1 0.47 3.56 0.101 0
2.2.2 响应面实验 在单因素实验的基础上，本研究利 C 2 5.75 1 5.75 43.22 0.000 3
残差 0.93 7 0.13
用 Box-Behnken 设计原理进行 3 因素 3 水平的响应面实 失拟项 0.72 3 0.24 4.62 0.086 8
验：以紫花地丁总香豆素得率（Y）为响应值，以液料比 纯误差 0.21 4 0.05
（A）、提取时间（B）、乙醇体积分数（C）为变量，优化紫花 总和 15.65 16
地丁总香豆素提取工艺。具体的因素与水平见表 1，实 pert 8.0.6 软件绘制响应面图及等高线图，结果见图 2。
验设计与结果见表2。 由图2可知，液料比与乙醇体积分数的交互作用较明显，
表1 紫花地丁总香豆素提取工艺优化响应面实验的因 其对紫花地丁总香豆素得率的影响最大。
素与水平 利用 Design Expert 8.0.6 软件求解上述多元二次回
水平 A/（mL/g） B/h C/% 归方程，得紫花地丁总香豆素的最优提取工艺为：液料
－1 20∶1 1.5 55
0 25∶1 2 65 比 25.5∶1、提取时间 1.89 h、乙醇体积分数 68.43%，预测
1 30∶1 2.5 75 紫花地丁总香豆素得率为20.79 mg/g。考虑到实际操作
采用 Design Expert 8.0.6 软件对表 2 结果进行回归 的可行性，本研究将最优提取工艺参数调整为：液料比
分析，得多元二次回归方程 Y＝20.65－0.16A－0.17B+ 25∶1、提取时间 1.9 h、乙醇体积分数 68%。按此提取工
2
2
0.79C－0.31AB+0.54AC+0.17BC－0.46A－0.34B－0.17C； 艺进行3次验证实验，得紫花地丁总香豆素平均得率为
2
随后，对回归方程进行方差分析，结果见表3。由表3可 （21.10±0.17）mg/g，RSD 为 0.80%（n＝3），与预测值的
知，所得多元二次回归方程的F为12.30（P＜0.01），说明 相对误差为1.49%，表明该提取工艺稳定、可行。
该模型的拟合度良好。3 个因素中，因素 C 对模型有显 2.3 紫花地丁总香豆素纯化物的制备
2
2
著影响（P＝0.000 5）；在二次项中，A 、C 亦对模型有显 按“2.2”项下最优提取工艺制得紫花地丁总香豆素
[9]
2
著影响（P＜0.05或P＜0.01），而B 对模型的影响不显著 提取物，按照相关文献的方法 ，使用HPD-100型大孔吸
（P＞0.05）。 附树脂以50%乙醇洗脱，得到紫花地丁总香豆素纯化物
为评价各因素的交互作用，本研究采用 Design Ex‐ （淡黄色粉末，总香豆素含量以秦皮乙素计为43.8%）。

中国药房 2022年第33卷第20期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 ·2473·