Page 46 - 《中国药房》2022年20期
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increased the content of LDH，as well as decreased the content of SOD. CONCLUSIONS The extraction technology of total
          coumarin from V. yedoensis is optimized successfully；the purified product of obtained extract has good antioxidant and anti-tumor
          activities.
          KEYWORDS     Viola yedoensis；total coumarin；extraction technology；antioxidant effect；anti-tumor effect



              紫花地丁是堇菜科堇菜属植物紫花地丁 Viola ye‐                     20201223）均购自南京建成生物工程研究所；水为超
          doensis Makino的干燥全草，具有清热解毒、凉血消肿的                    纯水。
              [1]
          功效 。现代药理研究证实，紫花地丁具有抗菌、抗肿瘤                           1.3 细胞
                        [2]
          等多种生物活性 。已有研究表明，紫花地丁提取物可                                人 宫 颈 癌 细 胞 HeLa、人 胆 管 细 胞 型 肝 癌 细 胞
          通过靶向蛋白酶等方式抑制肺癌细胞侵袭，对人非小细                            HCCC-9810、人肝癌细胞 HepG2、人乳腺癌细胞 MDA-
          胞肺癌细胞 A549 具有抑制作用，且其黄酮类成分还具                         MB-231 和人非小细胞肺癌细胞 A549 均购自中国科学
          有显著的抗氧化活性         [3―5] 。                           院上海生科院细胞资源中心。
              香豆素类成分是植物中一类重要的次生代谢产物，                          2 方法与结果
                                              [6]
          具有抗凝血、抗菌、抗病毒等多种生物活性 。紫花地丁                           2.1 紫花地丁总香豆素含量的测定
                                                        [7]
          含有丰富的香豆素类成分，如秦皮乙素、秦皮甲素等 。                               采用紫外-可见分光光度法测定紫花地丁总黄酮的
          本研究拟采用乙醇回流提取法提取紫花地丁总香豆素，                            含量（以秦皮乙素计）。
          利用响应面法优化其提取工艺，并初步评价所得纯化物                            2.1.1  标准曲线的绘制        精密称取秦皮乙素对照品适
          的抗氧化活性和抗肿瘤活性，旨在为该药材的开发与利                            量，用甲醇溶解，得质量浓度为354 μg/mL的储备液，贮
          用提供参考依据。                                            存于2～8 ℃冰箱内，备用。取上述储备液1 mL，以甲醇
          1 材料                                                定容于 10 mL 量瓶内，得质量浓度为 35.4 μg/mL 的母
          1.1  主要仪器                                           液。分别取该母液 0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mL，用甲
              本研究所用主要仪器包括 Cary60 型紫外-可见分                      醇定容于 5 mL 量瓶内，使用紫外-可见分光光度计于
          光光度计、Multiskan Go 型多功能酶标分析仪（美国                      350 nm 处测定吸光度。以秦皮乙素的质量浓度为横坐
          Thermo Fisher Scientific 公司），CKX53-SLP 型倒置相差        标（x）、吸光度为纵坐标（y）绘制标准曲线，得秦皮乙素
                                                                                               2
          显微镜（日本Olympus公司），TS2R-LS型荧光倒置显微                     的回归方程为y＝0.065 5x－0.023 6（R ＝0.999 3），提示
          镜（日本Nikon公司），TD-5Z型低速离心机（四川蜀科仪                      其检测质量浓度的线性范围为3.54～10.63 μg/mL。
          器有限公司）等。                                            2.1.2  供试品溶液的制备         将干燥紫花地丁药材粉碎，
          1.2  主要药品与试剂                                        过四号筛后保存，备用。称取上述粉末3.00 g，装于无纺
              紫花地丁药材（批号2001004）购自亳州市远光中药                      布内密封，采用乙醇回流提取法提取2次，过滤，合并滤
          饮片厂，由西南医科大学药学院中药资源与鉴定教研室                            液后用乙醇定容至250 mL量瓶内，即得供试品溶液。
          庄元春副教授鉴定为真品。                                        2.1.3  总香豆素含量及得率的测定              取“2.1.2”项下供
              秦皮乙素对照品（批号 5483，纯度 99.3%）购自上海                   试品溶液5 mL于10 mL离心管内，以1 000 r/min离心4
          诗丹德生物技术有限公司；无水乙醇、过硫酸钾、抗坏血                           min，取上清液 3 mL，置于 100 mL 量瓶内，用乙醇定容，
          酸（批号 20190528，纯度 99.7%）均购自成都金山化学试                   使用紫外-可见分光光度计于 350 nm 处测定吸光度，代
          剂有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-               入“2.1.1”项下回归方程计算总香豆素的质量浓度并按
          picrylhydrazyl，DPPH）、2-苯基-4，4，5，5-四甲基咪唑啉-           下式计算得率：Y＝NVC/M [式中，Y 为紫花地丁总香豆
          3-氧代-1-氧（2-phenyl-4，4，5，5-tetramethylimidazoline-3-  素得率（mg/g），N 为稀释倍数，V 为供试品溶液总体积
          oxide-1-oxyl，PTIO）（批号分别为 BTSJ18X80、BTSJ2020-       （mL），C 为总香豆素质量浓度（mg/mL），M 为紫花地丁
          0602）均购自成都润泽本土化工有限公司；2，2′-联氮双                       的质量（g）]。在此之前，按2020年版《中国药典》（四部）
         （3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐[2，2′-azino-bis（3-               “分析方法验证指导原则”进行方法学考察，结果均符合
          ethylbenzothiazoline-6-sulfonic） acid ammonium salt，  相关规定 。
                                                                      [8]
          ABTS，批号 L1803054）购自阿拉丁试剂（上海）有限公                     2.2 紫花地丁总香豆素提取工艺的优化
          司；CCK-8 试剂盒（批号 TN618）购自北仁化学科技（北                     2.2.1  单因素实验      按“2.1.2”项下方法操作，采用乙醇
          京）有限公司；Hoechst 33258 试剂盒（批号 20210708）购              回流提取法提取紫花地丁总香豆素。设置乙醇体积分
          自北京索莱宝科技有限公司；超氧化物歧化酶（supero-                        数为 65%，提取时间为 2 h，提取 2 次，考察不同液料比
          xide dismutase，SOD）试剂盒、乳酸脱氢酶（lactate dehy‐          [10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1，mL/g（下同）]对紫花地丁
          drogenase，LDH）试 剂 盒（ 批 号 分 别 为 20210721、            总香豆素得率的影响；设置乙醇体积分数为 65%，液料


          ·2472·   China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20                                 中国药房    2022年第33卷第20期
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