Page 92 - 《中国药房》2022年18期

2.3 样本的预处理 为 50.0～5 000、25.0～2 500 ng/mL，定量下限分别为
2.3.1 血浆样本的预处理 取血浆样本50 µL、甲醇2.5 50.0、25.0 ng/mL；PBS 样品中线性范围均为 2.00～200
µL，涡旋混匀，加入100 ng/mL的内标溶液300 µL，涡旋 ng/mL，定量下限均为2.00 ng/mL。
后于 4 ℃下以 16 000 r/min 离心 15 min，取上清液 100 2.4.3 准确度和精密度试验 取“2.2.3”项下质控血浆
µL，置于1.5 mL离心管中，加水900 µL，涡旋混匀，取上 样品溶液和质控PBS样品溶液，每浓度各5份，于同日内
清液进样分析。 按“2.3”项下方法预处理，再按“2.1”项下色谱与质谱条
2.3.2 PBS 样本的预处理 取 PBS 样本 100 µL、甲醇
件进样分析，考察日内精密度；连续测定 3 d，考察日间
2.5 µL，涡旋混匀，加入 10.0 ng/mL 的内标溶液 300 µL，
精密度。以实测浓度与理论浓度进行比较，用相对误差
涡旋后于4 ℃下以16 000 r/min离心15 min，取上清液进
（relative error，RE）考察准确度。结果显示，各样品的日
样分析。
内、日间 RSD 均不高于 12.9%，RE 为－6.3%～3.5%，符
2.4 方法学考察
[5]
合生物样品定量分析的要求 。
2.4.1 专属性考察 分别取 PBS、空白血浆、伊马替尼
2.4.4 提取回收率与基质效应考察 取“2.2.3”项下质
（50.0 ng/mL）及其代谢物（25.0 ng/mL）的标准曲线血浆
控血浆样品溶液（伊马替尼 120、750、4 000 ng/mL，代谢
样品溶液、患者血浆样本适量，按“2.3”项下方法预处理，
物 60.0、375、2 000 ng/mL），每浓度各 6 份，按“2.3”项下
再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，记录色谱图，
方法预处理，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，
详见图1（PBS和空白血浆图略）。由图1可知，待测成分
记录峰面积（A1 ）。取空白血浆适量，共 6 份，按“2.3”项
和内标的保留时间分别为1.48、1.26、1.43 min，各峰峰形
良好，无杂峰干扰，空白血浆中的小分子内源性物质及 下方法预处理后，分别加入伊马替尼对照品溶液和代谢
PBS对测定无干扰，表明本方法专属性良好。 物溶液使其质量浓度与上述质量浓度对应，再按“2.1”项
m/z 494.4→394.2 m/z 494.4→394.2 下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积（A2 ）。同时按
1.48 12 000 1.50 [5]
2 000 2020 年版《中国药典》（四部） 要求，配制伊马替尼质量
8 000
1 000 1 1 浓度分别 120、4 000 ng/mL，代谢物质量浓度分别为
4 000
0 0 60.0、2 000 ng/mL的低、高质量浓度基质效应样本溶液，
0 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0
每浓度各 6 份，按“2.3”项下方法预处理，再按“2.1”项下
m/z 480.4→394.2 m/z 480.4→394.2
300 1.26 1 000 1.25 色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积（A3 ）。按流动相
intensity/cps 200 2 intensity/cps 600 2 比例制备与上述浓度对应的伊马替尼及其代谢物对照
800
400
100
200
0 0 溶液，每浓度各6份，按“2.3”项下方法预处理，再按“2.1”
0 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0
m/z 502.4→394.2 m/z 502.4→394.2 项下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积（A4 ）。提取
4 000 1.43 1.43
4 000 回收率＝A1/A2×100%，基质因子＝A3/A4×100%。结果
3 000
2 000 3 2 000 3 显示，伊马替尼及其代谢物、内标的平均提取回收率分
1 000
0 0 别 为 89.2%～102.0%（RSD≤12.8%）、88.8%～99.7%
0 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0
t/min t/min （RSD≤14.3%）、99.0%（RSD＝8.8%），平均基质因子分
A.标准曲线血浆样品 B.患者血浆样本
别 为 98.2%～103.3%（RSD≤4.6%）、99.8%～101.1%
1：伊马替尼；2：N-去甲基伊马替尼；3：内标
图1 伊马替尼及其代谢物、内标的典型色谱图 （RSD≤6.1%）、107.0%（RSD＝11.7%），符合生物样品定
[5]
量分析的要求 。
2.4.2 线性关系考察 取“2.2.3”项下标准曲线样品溶
2.4.5 稳定性试验 按“2.2.3”项下方法配制伊马替尼
液，按“2.3”项下方法预处理，再按“2.1”项下色谱与质谱
质量浓度分别为120、4 000 ng/mL，代谢物质量浓度分别
条件进样分析，记录峰面积。以待测成分质量浓度为横
为 60.0、2 000 ng/mL 的质控血浆样品溶液，每浓度各 12
坐标（x）、待测成分与内标峰面积的比值为纵坐标（y）进
行线性回归（权重系数为1/C）。结果显示，血浆样品中 份，各取3份分别于室温放置20 h、4 ℃自动进样器放置
2
伊 马 替 尼 的 回 归 方 程 为 y＝0.002 00x+0.002 30（r＝ 20 h、冷冻（－70 ℃）长期保存、－70 ℃反复冻融3次后，
0.998 3），代谢物的回归方程为y＝0.000 620x+0.000 757 按“2.3”项下方法预处理，再按“2.1”项下色谱与质谱条
（r＝0.997 1）；PBS 样品中伊马替尼的回归方程为 y＝ 件进样分析，记录峰面积。以实测浓度与理论浓度进行
0.003 67x+0.001 64（r＝0.998 4），代谢物的回归方程为 比较，用RE考察稳定性。结果显示，伊马替尼及其代谢
y＝0.003 46x+0.001 77（r＝0.999 0）。这表明血浆样品 物浓度的 RSD 均不高于 8.3%（n＝3），RE 为－7.4%～
中伊马替尼及其代谢物的检测质量浓度线性范围分别 8.5%，表明待测成分在上述各种条件下稳定性良好。

·2258· China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18 中国药房 2022年第33卷第18期