Page 91 - 《中国药房》2022年18期

metabolites and the protein binding rates were －0.298 5 and －3.332 3，respectively（all P＜0.05）. CONCLUSIONS The method
for determining the plasma protein binding rates of imatinib and its metabolites is successfully established. The plasma protein
binding rates of imatinib and its metabolites in patients with GIST are negatively correlated with drug concentration.
KEYWORDS imatinib；N-desmethyl imatinib；equilibrium dialysis；liquid chromatography-tandem mass spectrometry；plasma
protein binding rate

伊马替尼是第一个被美国 FDA 批准用于胃肠道间 谱纯，乙酸铵为分析纯，水为去离子纯化水。
质瘤（gastrointestinal stromal tumors，GIST）的酪氨酸激 1.3 血浆来源
酶抑制剂，该药可显著延长晚期 GIST 患者的无复发生 空白血浆由南京医科大学第一附属医院血库提供。
[1]
存期 。伊马替尼被吸收进入血液循环后，在血浆中以 2 方法与结果
结合型与游离型药物存在，其中结合型药物在体内主要 2.1 色谱条件与质谱条件
与白蛋白（albumin，ALB）、球蛋白（globulin，GLB）和α1- 2.1.1 色谱条件 以 Agilant ZORBAX Eclipse Plus C18
酸性糖蛋白（alpha-1-acid glycoprotein，AGP）结合，而只 （2.1 mm×50 mm，1.8 μm）为色谱柱，以乙腈-10 mmol/L
有游离型药物才是伊马替尼发挥药理作用的重要部 乙酸铵（含0.1%乙酸）溶液（77∶23，V/V）为流动相；柱温
[2]
分 。伊马替尼的主要代谢物为 N-去甲基伊马替尼，两 为35 ℃；流速为0.5 mL/min；进样量为1.0 μL；分析时间
者具有相似的生物活性和效应，且与体内结合蛋白均具
为2.5 min。
有较高的亲和力 [3―4] 。药物蛋白结合率的微小变化可能 2.1.2 质谱条件 离子源为电喷雾离子源；监测方式为
会对药物游离浓度产生显著影响，进而通过浓度-效应 多反应监测；采集模式为正离子；离子化电压为 5 500
[5]
关系影响其药理作用 。因此，测定体内药物的蛋白结
V；离子源温度为550 ℃；雾化气压为45 psi；涡轮气压为
合率就显得尤为重要。
55 psi；气帘气压为 35 psi；碰撞气压为 10 psi；用于定量
虽然国内外已有同时测定伊马替尼及其代谢物的
分析的离子对分别为 m/z 494.4→394.2（伊马替尼）、m/z
报道，但样品处理方法较繁琐，灵敏度不高，检测范围不 480.4→394.2（N-去甲基伊马替尼）、m/z 502.4→394.2
符合临床要求，且大多采用超滤法 [6―8] ，该方法存在药物
（内标）。
容易和超滤装置发生非特异性结合的缺点。目前也尚
2.2 溶液的制备
未有研究报道伊马替尼及其代谢物与不同蛋白的结合 伊马替尼对照品溶液及其代谢物溶液 精密称
情况。为此，本研究建立了平衡透析法结合液相色谱- 2.2.1
取伊马替尼对照品 10.22 mg（经纯度换算为 10.02 mg）、
串 联 质 谱（liquid chromatography-tandem mass spectro-
metry，LC-MS/MS）法测定伊马替尼及其代谢物（N-去甲 N-去甲基伊马替尼对照品 5.13 mg（经纯度换算为 5.03
mg），分别置于10 mL棕色量瓶中，用甲醇-水（1∶1，V/V）
基伊马替尼）与不同蛋白结合率的方法，并同法检测
溶解并定容，混匀，制成质量浓度为 1.00 mg/mL 的伊马
GIST 患者血浆中两者的游离药物浓度，旨在为伊马替
尼的安全用药提供参考。 替尼对照品溶液和0.503 mg/L的代谢物溶液，于－40 ℃
1 材料 冰箱保存。
2.2.2 内标溶液 取伊马替尼-d8 0.50 mg，置于 10 mL
1.1 主要仪器
棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成质量浓度为 50.0
本研究所用主要仪器有1290 Infinity型高效液相色
μg/mL 的内标储备液；取内标储备液适量，用甲醇稀释
谱仪（美国Agilent公司），AB-SCIEX API 4000型串联四
极杆质谱仪（美国Applied Biosystem公司），Stratos 型高 至所需质量浓度即可。
速冷冻离心机、Single-Use RED Plate with Inserts型快速 2.2.3 标准曲线样品溶液和质控样品溶液 取“2.2.1”
平衡透析装置（美国Thermo Fisher Scientific公司）等。 项下伊马替尼对照品溶液及其代谢物溶液适量，用甲醇
1.2 主要药品与试剂 稀释后，各取2.5 µL，加入空白血浆50 µL，涡旋混匀，制
伊马替尼对照品（纯度 98%，批号 LPC0P57）、N-去 成伊马替尼质量浓度分别为 50.0、100、250、500、1 000、
甲基伊马替尼对照品（纯度98%，批号LN90O52）均购自 3 000、4 500、5 000 ng/mL，代谢物质量浓度分别为25.0、
北京百灵威科技有限公司；伊马替尼-d8（内标，纯度 50.0、125、250、500、1 500、2 250、2 500 ng/mL 的系列标
98.7%，批号 2-AJK-132-1）购自加拿大 Toronto Research 准曲线血浆样品溶液，以及伊马替尼质量浓度分别为
Chemicals 公司；ALB（纯度 20%，批号 S20170005）购自 50.0、120、750、4 000 ng/mL，代谢物质量浓度分别为
德 国 CSL Behring GmbH 公 司 ；GLB（纯 度 5%，批 号 25.0、60.0、375、2 000 ng/mL 的质控血浆样品溶液。取
S19993042）购自成都蓉生药业有限公司；AGP（纯度≥ PBS 100 µL，同法制备伊马替尼及其代谢物质量浓度分
99%，批号 SLBJ6840V）购自美国 Sigma 公司；磷酸盐缓 别均为 2.00、5.00、10.0、20.0、40.0、120、180、200 ng/mL
冲 溶 液（phosphate buffer saline，PBS，pH 7.2，批 号 的系列标准曲线PBS样品溶液，以及质量浓度分别均为
20012027）购自美国Gibco公司；甲醇、乙酸、乙腈均为色 2.00、4.80、30.0、160 ng/mL的质控PBS样品溶液。

中国药房 2022年第33卷第18期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18 ·2257·