Page 41 - 《中国药房》2022年18期

2.1.4 专属性试验 取上述混合对照品溶液、供试品溶 2.1.8 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号
液、阴性溶液（70% 甲醇）各适量，按“2.1.1”项下色谱条 S1），分别于室温下放置 0、2、5、9、16、24、36 h 时按
件进样分析，记录色谱图（图1，阴性溶液图略）。结果显 “2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。结果显
示，各成分峰的理论板数均不低于 5 500，且分离良好； 示，芸香柚皮苷等 11 个待测成分峰面积的 RSD 均小于
阴性溶液对含量测定无干扰。 2%（n＝7），表明供试品溶液于室温下放置 36 h 稳定性
300 良好。
250
200 2.1.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的便通胶
mAU 150 1 2 3 6 9
100
50 4 5 7 8 10 11 囊（编号S1）内容物0.5 g，共9份，按80%、100%、120%分
0 别加入混合对照品溶液（芸香柚皮苷等11个待测成分的
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
t/min 质量浓度依次为0.479、0.631、0.917、0.769、0.194、0.383、
A.混合对照品
300 0.155、0.239、0.294、0.107、0.059 mg/mL），按“2.1.3”项下
250 3
200 2 方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样分
mAU 150 1 6 9 析，记录峰面积并计算加样回收率。结果显示，芸香柚
100
50 4 5 7 8 10 11
0 皮苷等 11 个待测成分的平均加样回收率为 96.95%～
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
t/min 100.13%（RSD为0.64%～1.43%，n＝9）。
B.供试品（编号S1） 2.1.10 相对校正因子的计算 取“2.1.5”项下系列线性
1.芸香柚皮苷；2.柚皮苷；3.新橙皮苷；4.松果菊苷；5.管花苷A；6.
工作溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面
毛蕊花糖苷；7.异毛蕊花糖苷；8.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷；9.矢车菊素-
积，以毛蕊花糖苷为内参物（毛蕊花糖苷的出峰时间居
3-O-芸香糖苷；10.白术内酯Ⅲ；11.白术内酯Ⅰ
图1 芸香柚皮苷等待测成分混合对照品、供试品的 中、含量较高、质量稳定），按下式计算毛蕊花糖苷相对
于其他成分的相对校正因子（fsi ），即fsi＝ƒs/ƒi＝（W i×As ）/
HPLC图
（Ws×Ai ）。式中，As为内参物的峰面积，Ws为内参物的质
2.1.5 线性关系考察 精密吸取“2.1.2”项下混合对照 量浓度，Ai为待测成分的峰面积，W i为待测成分的质量浓
品贮备液 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，用 70% 甲醇分别 度 。结果显示，其他 10 个待测成分（顺序同表 1，毛蕊
[9]
稀释至20 mL，得系列线性工作溶液，按“2.1.1”项下色谱
花糖苷除外）的平均 fsi 分别为 0.840 0、0.757 3、0.626 7、
条件进样分析，记录峰面积。以各待测成分的质量浓度
0.702 0、2.229 4、2.760 5、1.567 8、1.161 2、3.757 3、5.157 2，
为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归。结果
RSD为0.21%～1.89%（n＝6）。
见表1。
2.1.11 不同试验条件对 fsi的影响 取“2.1.2”项下混合
表1 芸香柚皮苷等 11 个待测成分的回归方程与线性 对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，分别考
范围
察不同HPLC仪（Shimadzu LC-20A 型、e2695型，下同）、
待测成分 回归方程 r 线性范围/（µg/mL） 色谱柱（Venusil XBP C18、Cosmosil C18、Durashell C18，规
芸香柚皮苷 Y＝2.110 1×10 X+781.4 0.999 6 4.26～213.00
6
柚皮苷 Y＝2.319 2×10 X－1 174.9 0.999 3 4.68～234.00 格均为 250 mm×4.6 mm，5 μm，下同）、流速（0.8、1.0、
6
6
新橙皮苷 Y＝2.819 4×10 X－438.5 0.999 5 7.06～353.00 1.2 mL/min）、柱温（25、30、35 ℃）对 fsi的影响。结果显
6
松果菊苷 Y＝2.513 6×10 X－1 210.7 0.999 4 5.85～292.50 示，其他10个待测成分（毛蕊花糖苷除外）fsi的RSD均小
管花苷A Y＝7.951 2×10 X+118.4 0.999 6 1.77～88.50
5
6
毛蕊花糖苷 Y＝1.756 7×10 X+826.7 0.999 3 3.55～177.50 于2%。
异毛蕊花糖苷 Y＝6.384 7×10 X+735.6 0.999 4 1.39～69.50 2.1.12 色谱峰定位 取“2.1.2”项下混合对照品溶液，
5
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷 Y＝1.132 0×10 X－1 059.3 0.999 6 2.07～103.50 按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，分别考察不同色谱
6
6
矢车菊素-3-O-芸香糖苷 Y＝1.512 9×10 X+721.5 0.999 3 2.89～144.50
5
白术内酯Ⅲ Y＝4.699 3×10 X+453.6 0.999 5 0.96～48.00 仪、色谱柱对相对保留时间（Ris ）的影响。结果显示，其
5
白术内酯Ⅰ Y＝3.448 1×10 X－1 225.5 0.999 2 0.54～27.00 他 10 个待测成分（毛蕊花糖苷除外）Ris的 RSD 均小于
2.1.6 精密度试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号 2%，表明Ris法可以对目标化合物色谱峰进行准确定位。
S1），按“2.1.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰 2.1.13 15 批样品的含量测定 取 15 批便通胶囊，按
面积。结果显示，芸香柚皮苷等11个待测成分峰面积的 “2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱
RSD均小于2%（n＝6），表明方法精密度良好。 条件进样分析，记录峰面积，分别按外标法、HPLC-
2.1.7 重复性试验 取便通胶囊（编号 S1），共 6 份，按 QAMS法（以毛蕊花糖苷为内参物）计算含量，每样品平
“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱 行测定 3 次，采用相对平均偏差（relative average devia‐
条件进样分析，记录峰面积并按外标法计算含量。结果 tion，RAD）考察 2 种方法所得结果的差异（表 2）。结果
显示，芸香柚皮苷等 11 个待测成分含量的 RSD 均小于 显示，2种方法所得含量测定结果的RAD均小于2%，表
2%（n＝6），表明方法重复性良好。 明2种方法的测定结果无明显差异。

中国药房 2022年第33卷第18期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18 ·2211·