Page 35 - 《中国药房》2022年18期
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知母皂苷 BⅡ、知母皂苷 E 和知母皂苷 AⅢ）为研究对                       0.1、0.2、5、80 ng/mL，王百合苷Ⅰ的质量浓度分别为0.4、
          象，采用液相色谱-串联质谱法检测 BZD 及其单味药在                        0.8、20、320 ng/mL，知母皂苷 AⅢ的质量浓度分别为
          大鼠体内的药动学特征，以期为该经典方剂的临床应用                           0.5、1、25、400 ng/mL。
          提供实验依据。                                            2.3 血浆样品前处理
          1 材料                                                   采用蛋白沉淀法对血浆样品进行前处理。将冻存

          1.1 主要仪器                                           于－80 ℃下的血浆解冻，取 50 μL 置于 1.5 mL 离心管
              本研究所用主要仪器包括 LC-30AD 型超高效液相                     内，加入 200 ng/mL 野黄芩苷（内标）甲醇溶液，再加入
          色谱仪（日本 Shimadzu 公司）、AB QTRAP 5500 型质谱              450 μL 甲醇，涡旋混匀 2 min，在 4 ℃下以 13 500 r/min
          仪（美国AB Sciex公司）等。                                  离心 5 min，取上清液，过 0.22 μm 微孔滤膜后，取 2 μL
          1.2 主要药品与试剂                                        进样分析。
              百合药材（产地湖南）、知母药材（产地内蒙古）均购                       2.4 色谱条件与质谱条件
          自重庆慧远药业有限公司，经陆军军医大学生药学与中                           2.4.1  色谱条件      以 Agilent Poroshell 120 EC-C18 （150
          药学教研室高宁教授鉴定均为真品。新芒果苷对照品、                           mm×3.0 mm，2.7 μm）为色谱柱，以 5 mmol/L 乙酸铵溶
          芒果苷对照品、王百合苷A对照品、王百合苷Ⅰ对照品、                          液（A）-甲醇（B）为流动相进行梯度洗脱（0～2 min，
          野黄芩苷对照品（内标）均购自上海历鼎生物技术有限                           10%B→95%B；2～9 min，95%B；9～9.1 min，95%B→
          公司，知母皂苷 BⅡ对照品、知母皂苷 E 对照品、知母皂                       10%B；9.1～10 min，10%B）；柱温为 25 ℃；流速为 0.4
          苷 AⅢ对照品均购自重庆威斯腾生物医药科技有限责                           mL/min；进样量为2 μL。
          任公司，纯度均大于98%；乙腈和甲酸为色谱纯，其余试                         2.4.2  质谱条件     采用电喷雾离子源，以多反应监测模

          剂均为分析纯，水为超纯水。                                      式进行负离子扫描；气帘气压力为25 psi；雾化气压力为
          1.3  实验动物                                          40 psi，辅助加热气压力为60 psi；离子源温度为550 ℃；
              SPF 级雄性 SD 大鼠，共 18 只，体质量为 200～220              离子源电压为－4 000 V。优化后的监测参数见表1。
                                                                    表1    新芒果苷等待测成分的监测参数
          g，由陆军军医大学实验动物中心提供，实验动物生产许
                                                              待测成分          母离子m/z  子离子m/z  去簇电压/eV  碎片碰撞电压/eV
          可证号：SCXK（渝）2017-0002。
                                                              新芒果苷           583.4   331.0   －262.0    －51.8
          2 方法与结果                                             芒果苷            421.2   300.9   －227.4    －26.6
                                                              王百合苷A          399.3   163.1   －156.1    －28.0
          2.1  储备液和工作液的配制
                                                              王百合苷Ⅰ          441.1   381.2   －174.1    －25.9
              分别精密称取新芒果苷、芒果苷、王百合苷A、王百                         知母皂苷BⅡ         919.5   757.4   －256.7    －61.7
                                                              知母皂苷E          933.6   771.2   －271.7    －54.6
          合苷Ⅰ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷E、知母皂苷AⅢ、野黄
                                                              知母皂苷AⅢ         739.7   577.7    －68.8    －43.2
          芩苷（内标）对照品各适量，用甲醇溶解并稀释成1 mg/mL                       野黄芩苷（内标）       461.2   285.1    －76.2    －30.0
          的单一储备液。临用时，用甲醇将各储备液稀释成所需                           2.5  方法学验证
          工作液。所有储备液和工作液均于4 ℃下保存。                             2.5.1  专属性    取6只大鼠的空白血浆、空白血浆+7种
          2.2  校正标样和质控样品的配制                                  待测成分（定量下限质量浓度）、给药8 h后的血浆样品，
              取“2.1”项下 7 种待测成分的工作液各 10 μL，加至                 按“2.3”项下方法处理后，再按“2.4”项下条件进样分析，
          含 930 μL 空白血浆的 1.5 mL EP 管中，涡旋混匀 2 min，            记录色谱图（图1，空白血浆色谱图略）。结果显示，新芒
          再逐级稀释成7个系列质量浓度的校正标样，其中新芒                           果苷、芒果苷、王百合苷 A、王百合苷Ⅰ、知母皂苷 BⅡ、
          果苷、芒果苷和知母皂苷BⅡ的系列质量浓度均分别为                           知母皂苷 E、知母皂苷 AⅢ和野黄芩苷（内标）的保留时
          1、4、10、40、100、400、1 000 ng/mL，王百合苷A和知母皂            间分别约为 2.9、3.3、3.4、3.6、3.9、4.1、5.7、3.4 min，且峰

          苷 E 的系列质量浓度均分别为 0.1、0.4、1、4、10、40、100              形对称，无内源性杂质干扰，表明该方法专属性良好。
          ng/mL，王百合苷Ⅰ的系列质量浓度分别为 0.4、1.6、4、                   2.5.2  线性关系与定量下限           按“2.2”项下方法制备含
          16、40、160、400 ng/mL，知母皂苷AⅢ的系列质量浓度分                 7 种待测成分的 7 个系列质量浓度的校正标样，按“2.3”
          别为 0.5、2、5、20、50、200、500 ng/mL。同法制备定量下             项下方法处理后，再按“2.4”项下条件进样分析，记录峰
          限和低、中、高质量浓度的质控样品，其中新芒果苷、芒                          面积。以待测成分质量浓度为横坐标（x）、待测成分与
          果苷和知母皂苷 BⅡ的质量浓度均分别为 1、2、50、800                     内标的峰面积比值为纵坐标（y）进行线性回归。线性关
          ng/mL，王百合苷 A 和知母皂苷 E 的质量浓度均分别为                     系与定量下限考察结果见表2。


          中国药房    2022年第33卷第18期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18  ·2205·
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