Page 18 - 《中国药房》2022年18期

[3]
富的黄酮碳苷类成分 对α-葡萄糖苷酶的抑制活性尚未 水（50∶50，V/V）洗脱所得]、化合物 4[25 mg，由 Fr.3 经甲
见报道。为了解铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分对 α-葡 醇-水（50∶50，V/V）洗脱所得]、化合物5[11 mg，由Fr.3经
萄糖苷酶活性的影响，本研究采用大孔吸附树脂和制备 甲醇-水（50∶50，V/V）洗脱所得]。
型高效液相色谱（HPLC）法对铁皮石斛叶中的黄酮碳苷 2.2 化合物1～5的结构式
类成分进行分离和纯化，通过紫外光谱（UV）、核磁共振 采用 HR-ESI-MS、UV、IR，一维/二维 NMR 谱和圆
（NMR）、高分辨电喷雾离子化质谱（HR-ESI-MS）等波谱 二色光谱等方法推导了化合物 1 的结构式；通过测定
13
1
方法对化合物结构进行推导和鉴定；通过体外实验方法 HR-ESI-MS 和 NMR 氢谱、碳谱（H-NMR、C-NMR），并
评价各化合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。 与文献比较，鉴定了化合物 2～5 的结构。化合物 1～5
1 材料 的结构式见图1。
1.1 主要仪器 HO
OH 4″′ OH
本研究所用主要仪器有 Bruker AVANCE 600 型 3″′ R OH
2″′ 5″′ 6″′ 3′
NMR 波谱仪（美国 Bruker BioSpin 公司），6545 型四极 HO O 2′ 4′ OH HO O OH
HO
6″ HO 1″′ O 1 5′ HO
8
杆-飞行时间质谱仪、1200 型 HPLC 仪、1260 Infinity Ⅱ HO 4″ 5″ 7 9 2 1′ 6′ HO O
3″ O 6 10 3 O
制备型 HPLC 仪（美国 Agilent 公司），Nicolet 6700 型 1″ 5 4 HO HO
HO 2″ OH O OH OH O
红外光谱（IR）仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），
化合物1 R＝＝H
化合物2
UV-1102型紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有 化合物4 R＝＝OH
HO OH
限公司），P-2000 型旋光仪、J-1500 型圆二色光谱仪（日 OH OH HO
本JASCO公司）等。 HO O
HO O OH OH
1.2 主要药品与试剂 HO O
HO HO O
铁皮石斛叶由浙江铁枫堂生物科技股份有限公司 O HO O
HO
提供，经上海交通大学药学院彭崇胜副教授鉴定为兰科 HO OH OH O HO OH OH O
石斛属植物铁皮石斛D. officinale Kimura et Migo的叶。 化合物3 化合物5
α-葡萄糖苷酶（来源于酿酒酵母）购自美国 Sigma- 图1 化合物1～5的结构式
Aldrich公司；对-硝基苯基-α-D-吡喃葡糖苷（p-nitrophenyl- 2.2.1 化合物 1 化合物 1 为淡黄色无定形粉末，易溶
α-D-glucopyranoside，pNPG）购自上海麦克林生化科技 于甲醇，[α] D-15.82（c 0.01，MeOH）；UV 在波长 270、335
25
有限公司；D101 型大孔吸附树脂（规格 0.3～1.2 mm）购 nm 处有最大吸收；IR 提示含有羟基（3 385 cm ）、芳香
－1
自国药集团化学试剂有限公司；磷酸盐缓冲液（PBS， 环（1 629、1 575、836 cm ）和芳香酮（1 648 cm ）。推测
－1
－1
pH6.81）购自北京雷根生物技术有限公司；二甲基亚砜 化合物 1 为黄酮碳苷。HR-ESI-MS 显示质荷比（m/z）为
（dimethyl sulfoxide，DMSO）购自上海易恩化学技术有 561.161 1[M－H] （计算值 561.161 4），可推出该化合物
－
限公司；阿卡波糖片（批号BJ60665，规格50 mg）购自拜 的分子式为C27H30O13。 H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）谱
1
耳医药保健有限公司；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分 （表 1）在低场区显示出 5 组信号：δH 14.04（1H，s，D2O 交
析纯，水为超纯水。 换）为黄酮母核 5-OH 的特征信号；δH 8.32（2H，d，J＝8.8
2 方法与结果 Hz，H-2′/6′）和 δH 6.89（2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′/5′）为 1
2.1 提取分离 组 AA′BB′耦合系统信号，提示结构中有对位取代苯
取干燥的铁皮石斛叶250 g，粉碎，加20倍量（mL/g） 环；δH 6.81（1H，s）可归属黄酮母核上 H-3 的信号；δH
纯水，加热回流提取 2 次，每次 2 h。水提物趁热过滤后 10.25、6.08（各1H，s，D2O交换）提示黄酮母核上另有2个
减压浓缩至 800 mL，再用无水乙醇室温醇沉 24 h；将醇 羟基取代；δH 4.67、5.02（各 1H）是糖端基氢信号。上述
沉后的上清液抽滤，滤液减压浓缩至250 mL，经D101型 数据提示化合物 1 为芹菜素 6，8-C-二糖苷，该化合物在
大孔吸附树脂吸附，以甲醇-水（0∶10、1∶9、1∶4、3∶7、 ESI-MS/MS 负离子模式下存在 1 组诊断离子（m/z 为
3∶2、19∶1，V/V）梯度洗脱，减压浓缩并真空干燥得6个主 353.066 2、325.071 7、311.056 1、297.076 6），进一步确证
13
流分（Fr.1～Fr.6）。Fr.2～Fr.3 采用制备型 HPLC 仪纯化 了芹菜素 6，8-C-二糖苷的推断 。 C-NMR（DMSO-d6，
[8]
得到以下化合物：化合物1[45 mg，由Fr.2经甲醇-水（50∶ 150 MHz）谱（表 1）显示出2 组糖基碳信号（10 个次甲基
50，V/V）洗脱所得]、化合物 2[13 mg，由 Fr.2 经甲醇-水 信号：δC67.8，71.7，71.8，72.2，73.8，74.1，74.5，75.1，75.8，
（50∶50，V/V）洗脱所得]、化合物3[14 mg，由Fr.3经甲醇- 77.3；2个甲基信号：δC 17.2，18.3），提示结构中存在鼠李

·2188· China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18 中国药房 2022年第33卷第18期