Page 23 - 《中国药房》2022年18期

decoction group （P＞0.05）. CONCLUSIONS The couplet medicinals of A. bidentatae-C. otophyllum can inhibit the level of
oxidative stress in the cerebral tissue of PD mice with hyperactivity of liver-Yang by targeting Nrf2，and play a protective role on
the brain neurons. Its effect is better than that of A.bidntatae and C.otophyllum，and it plays the same role as that of the formula in
tonifying the kidney，softening the liver and suppressing the Yang.
KEYWORDS Parkinson’s disease； hyperactivity of liver-Yang； Achyranthis bidentatae； Cynanchum otophyllum； couplet

medicinals；Zhengan xifeng decoction；oxidative stress；mice

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种中枢神经 酶 1（thioredoxin reductase 1，Trxr1）、核纤层蛋白 B（la‐
系统退行性疾病，多发于中老年人群，常伴有运动缺陷 min B）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phos‐
症状，黑质致密部多巴胺能神经元的丢失以及路易小体 phate dehydrogenase，GAPDH）抗 体（批 号 分 别 为 1、
[1]
的形成是该疾病的典型病理特征 。目前，除首选外源 1345S、2118S）均购于美国 Cell Signaling Technology 公
性补充多巴胺来治疗PD外，中医药防治PD具有独特优 司；兔源硫氧还蛋白互作蛋白（thioredoxin interacting
[3]
[2]
势 。中医学认为PD病机以肝肾为本，肝风内动为标 。 protein，Txnip）、核因子 E2 相关因子 2（nuclear factor-
震颤和身体摇动是中医藏象学说中肝风内动的病理表 erythroid 2-related factor 2，Nrf2）抗 体（批 号 分 别 为
现，肝阳上亢证是 PD 的主要证型，治以补肾柔肝、潜阳 ab188865、ab137550）均购于英国Abcam公司；生物素标
熄风 。以往研究采用单一的PD病理学模型，这很难体 记的山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗、SP 免疫组化法
[4]
现抗PD中药病证兼顾的作用特点。 试剂盒（批号分别为 00051405、0011404）均购于北京康
镇肝熄风汤为《医学衷中参西录》中的经典方剂，在 为世纪生物科技有限公司；总抗氧化能力（total antioxi‐
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治疗肝阳上亢型PD中有着显著效果 ，但是其复方成分 dant capacity，T-AOC）检测试剂盒、超氧化物歧化酶（su‐
繁多，药味之间关系作用复杂，研究难度较大。牛膝-白 peroxide dismutase，SOD）活 性 检 测 试 剂 盒 及 丙 二 醛
芍作为镇肝熄风汤的核心药对，在治疗 PD 的方剂中出 （malondialdehyde，MDA）含量检测试剂盒（批号分别为
现较多，牛膝补益肝肾、引火下行，白芍养血濡筋、缓急 BC1315、BC0170、BC0020）均购于北京索莱宝科技有限
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止痉，两药成对，可奏补肾柔肝、潜阳熄风之功 。本课 公司；引物由生工生物工程（上海）股份有限公司设计，
题组前期研究结果提示，在体外实验中牛膝和白芍的有 具体见表1。
效成分可抑制氧化应激的发生，对多巴胺能神经元具有 表1 Nrf 2等引物序列和扩增产物片段长度
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协同增效的保护作用 。基于此，本研究采用病证结合 基因 引物序列 产物长度/bp
Nrf2 上游：5’-CAAGAGCAACTCCAGAAGGAACAGG-3’ 25
的动物模型，探讨牛膝-白芍药对对肝阳上亢型PD小鼠
下游：5’-CACTGGTGTCTGTCTGGATATGCTG-3’ 25
脑组织氧化应激的影响，旨在为该药对治疗 PD 的机制 Trxr1 上游：5’-GGTGCGGTCCATGTAAAATGATTGC-3’ 25
研究提供参考。 下游：5’-GAAGCAAAGTTGGCATAGCGGAAAC-3’ 25
Txnip 上游：5’-GACGATGTGGACGACTCTCAAGAC-3’ 24
1 材料 下游：5’-TCACTGCACGTTGTTGTTGTTGTTG-3’ 25
1.1 主要仪器 β-actin 上游：5’-CAATGAGCGGTTCCGTTGCC-3’ 20
下游：5’-CCAGACAGCACTGTGTTGGC-3’ 20
本研究所用主要仪器有Stratagene Mx3005P型实时
1.3 动物
荧光定量PCR仪（美国Agilent 公司），ELX800型全自动
C57BL/6雄性小鼠，共60只，3月龄，体质量（25±2）
酶标仪（美国 BioTek 公司），JY-ZY2 型转移电泳槽、JY-
g，由南京大学-南京生物医药研究院提供，动物生产许
CZ1 型单垂直电泳槽（北京君意东方电泳设备有限公
司），CKX41 型 倒 置 显 微 镜（日 本 Olympus 公 司）， 可证号为 SCXF（苏）2015-0001。本实验方案经齐齐哈
HT7800型透射电子显微镜（日本Hitachi公司）等。 尔医学院伦理委员会审查批准，批件号为（齐）伦审
1.2 主要药品与试剂 〔2021〕127号。
附子、牛膝、白芍饮片（批号分别为 000001294、 2 方法
001001502、001001168）均购于北京同仁堂（亳州）饮片 2.1 药液的制备
有限责任公司，经齐齐哈尔医学院医药科学研究院李晓 分别取附子、牛膝、白芍饮片，按照传统煎药法制备
明副研究员鉴定均为真品。1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四 附子、牛膝、白芍、牛膝-白芍药对煎液，质量浓度分别为
氢吡啶（MPTP，批号M0896）购于美国Sigma公司；兔源 0.20、0.33、0.17、0.50 g/mL（以生药量计，下同）。镇肝熄
酪 氨 酸 羟 化 酶（tyrosine hydroxylase，TH）抗 体（批 号 风汤参考文献[8]制备，质量浓度为1.67 g/mL，于4 ℃保
J5248）购于美国 Santa Cruz 公司；兔源硫氧还蛋白还原 存备用。

中国药房 2022年第33卷第18期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18 ·2193·