Page 102 - 《中国药房》2022年18期

1 2.9 提取回收率试验
3.0×10 4
intensity 2.0×10 4 4 按“2.3”项 下 方 法 制 得 大 黄 酸 质 量 浓 度 分 别 为
1.0×10
0 80.00、800.0、8 000 ng/mL的低、中、高质量浓度质控血浆
1 2 3 4 5 6 7
t/min 样品（每质量浓度平行6份）并进行处理后，再按“2.1”项
2
1.5×10 4 下条件进样分析，得大黄酸和内标的峰面积（A1、A2 ）。精
intensity 1.0×10 4 4 密吸取空白血浆200 μL，按“2.3”项下方法处理后，取上
0.5×10
0
清液，加入大黄酸质控工作溶液，使其质量浓度与低、
1 2 3 4 5 6 7
t/min 中、高质量浓度对应（每质量浓度平行 6 份），再按“2.1”
A.空白血浆+大黄酸标准曲线工作溶液（20.00 μg/mL）
项下条件进样分析，得大黄酸和内标的峰面积（A3、A4 ）。
1
4.0×10 4 分别以 A1/A3×100%、A2/A4×100% 计算大黄酸和内标的
intensity 2.0×10 4
0 提取回收率，结果见表2。
1 2 3 4 5 6 7 表2 大黄酸定量分析的提取回收率与基质效应试验结
t/min
果（n＝6）
2
2.0×10 4
intensity 1.0×10 4 待测物 理论质量浓度/（ng/mL） 提取回收率（x±s）/% 基质因子（x±s）/%
100.0±2.3
大黄酸
80.00
104.4±1.7
0 800.0 102.2±0.9 102.7±2.4
1 2 3 4 5 6 7
t/min 8 000 92.0±1.9 100.2±1.1
B.受试者餐后口服双醋瑞因胶囊50 mg后1.0 h的血浆样品 内标 125.0 98.6±5.5 108.5±2.8
1：大黄酸；2.内标 2.10 基质效应试验
图1 大黄酸定量分析的典型MRM图
精密吸取6个不同来源的空白血浆200 μL，分别置
ng/mL的校正标样并进行处理后，再按“2.1”项下条件进 于 1.5 mL 离心管中，加入蛋白沉淀试剂（甲醇）600 μL，
样分析，记录峰面积。以待测物质量浓度为横坐标（c）、 振荡混匀约 1 min，于 2～8 ℃下以 23 755×g 离心 10
待测物与内标的峰面积比值为纵坐标（y），采用最小二 min，取上清液，即得血浆基质样品。精密吸取水 200
2
乘法（权重系数为1/c）进行线性回归，得回归方程为y＝ μL，置于 1.5 mL 离心管中，按上述方法处理，得纯溶液
0.001 4c+0.012 5（r＝0.999 4），大黄酸检测质量浓度的线 非基质样品。取血浆基质样品或纯溶液非基质样品
性范围为30.00～10 000 ng/mL，定量下限为30.00 ng/mL。 200 μL，加入大黄酸质控工作溶液10 μL和内标工作溶
2.7 残留试验 液 50 μL，混匀，即得低、中、高质量浓度样品溶液（每质
取 3 个空白血浆样品和“2.6”项下最高质量浓度校 量浓度平行 6 份）。取上述溶液 300 μL，加入稀释剂
正标样（10 000 ng/mL）进行残留试验。在检测最高质量 （水）600 μL，混匀后，分别按“2.1”项下条件进样分析，记
浓度校正标样后连续检测3个空白血浆样品，记录峰面 录大黄酸峰面积（B 血浆基质、B 非基质）和内标峰面积（C 血浆基质、
积。结果显示，3 个空白血浆样品中大黄酸和内标的峰 C 非基质），分 别 以 B 血浆基质/B 非基质 ×100%、C 血浆基质/C 非基质 ×

面积均为0，提示残留效应在可接受范围内，不影响待测 100%计算大黄酸和内标的基质因子，结果见表2。以大
[5]
物的检测 。 黄酸基质因子除以内标基质因子，计算得低、中、高质量
2.8 精密度与准确度试验 浓度样品溶液中大黄酸的平均内标归一化基质因子分
按“2.3”项下方法制得大黄酸质量浓度为 30.00 别为96.2%、94.7%、92.4%。
ng/mL 的定量下限质控血浆样品和 80.00、800.0、8 000 2.11 稳定性试验
ng/mL 的低、中、高质量浓度质控血浆样品。在至少 2 d 将 80.00、800.0、8 000 ng/mL 的低、中、高质量浓度
内，使用3个独立分析批、4个质量浓度的质控血浆样品 质控血浆样品（每质量浓度平行3份）在室温白光下放置
（每质量浓度平行 6 份）来评估批内、批间精密度（以 24 h、－20 ℃下储存49 d和反复冻融（－20 ℃～室温）循
RSD表示）和准确度（以RE表示），结果见表1。 环 3 次后，再按“2.3”项下方法处理，测得各样品实测质
表1 大黄酸定量分析的精密度与准确度试验结果 量浓度与理论质量浓度的RE均在±10.0%以内，提示质
（n＝6） 控血浆样品在上述条件下放置的稳定性较好。将低、
理论质量浓度/（ng/mL） 实测质量浓度（x±s）/（ng/mL） 批间RSD/% 批内RSD/% RE/% 中、高质量浓度质控血浆样品按“2.3”项下方法处理后，
30.00 30.66±2.25 10.1 4.1 2.2 在自动进样器（4 ℃）中放置 23 h 或在室温白光下放置
80.00 79.09±5.03 14.9 4.0 －1.1
800.0 821.1±32.2 9.9 2.1 2.6 24 h，测得各样品实测质量浓度与理论质量浓度的RE均
8 000 8 201±295 6.5 3.0 2.5 在±10.0% 以内，提示经处理的质控血浆样品在上述条

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