Page 101 - 《中国药房》2022年18期
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胶囊仿制药在中国健康受试者空腹状态下的药动学数                            压为－3 500 V；大黄酸和内标的定量离子对分别为 m/z
          据已有报道 。参考上述研究，结合原研制剂说明书推                           283.0→238.8、m/z 268.9→224.8，去簇电压分别为－50、
                    [4]
          荐（双醋瑞因宜餐后服用），本研究拟采用甲醇沉淀蛋白                          －125 V，射入电压分别为－3、－10 V，碰撞电压分别
          预处理血浆样品，使用液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/                       为－35、－50 V，碰撞室射出电压均为－5 V。
          MS）法测定人血浆中双醋瑞因活性代谢产物大黄酸的                           2.2 大黄酸和内标相关溶液的配制
          浓度；同时，拟初步评价双醋瑞因胶囊原研制剂（参比制                          2.2.1  大黄酸贮备溶液及工作溶液              称取大黄酸对照
          剂）与国产仿制药（受试制剂）在中国健康受试者体内的                          品 10.00 mg，转移至 10 mL 量瓶中，加入 0.5 mol/L 氢氧
          餐后生物等效性，以期为国产双醋瑞因胶囊的上市及临                           化钠溶液20 μL，再用甲醇定容，混匀，得质量浓度为1.0
          床应用提供参考依据。                                         mg/mL 的大黄酸标准曲线贮备溶液。取上述贮备溶液
          1 材料                                               适量，用甲醇稀释，得质量浓度分别为 200.0、100.0、
          1.1 主要仪器                                           40.00、20.00、10.00、4.000、2.000、0.600 0 μg/mL 的大黄
              本研究所用主要仪器包括 1200 型高效液相色谱仪                      酸标准曲线工作溶液，160.0、16.00、1.600 μg/mL的大黄
         （美国 Agilent 公司），Turboionspray 型电喷雾离子源、              酸质控工作溶液和0.600 0 μg/mL的大黄酸定量下限工
                                        ®
          API4000 型三重四极杆串联质谱仪、Analyst 1.6 数据采                作溶液。
          集软件（美国AB Sciex公司），XS 105DU型分析天平（瑞                  2.2.2  内标贮备溶液及工作溶液               称取内标对照品
          士 Mettler Toledo 公司），Milli-Q Academic 型纯水机（美       10.00 mg，转移至10 mL量瓶中，用甲醇定容，混匀，得质

          国Millipore公司）等。                                    量浓度为1.0 mg/mL的内标贮备溶液。取上述贮备溶液
          1.2  主要药品与试剂                                       适量，用甲醇稀释，得质量浓度为0.500 0 μg/mL的内标
              本研究所用受试制剂双醋瑞因胶囊（批号T93-013，                     工作溶液。
          规格50 mg）由江苏某制药有限公司提供；参比制剂双醋                        2.3  大黄酸校正标样和质控血浆样品的配制及处理
                               ®
          瑞因胶囊（商品名安必丁 ，国药准字 HJ20150130，规格                        精密吸取空白血浆 200 μL，转移至 1.5 mL 离心管
          50 mg）由阿根廷TRB Pharma S.A.公司生产并由昆明积                 中，加入大黄酸标准曲线、质控工作溶液或定量下限
          大 制 药 股 份 有 限 公 司 分 装 。 大 黄 酸 对 照 品（批 号            工作溶液 10 μL 和内标工作溶液 50 μL，再加入蛋白
          110757-200206，纯度 100.0%）、大黄素对照品（内标，批               沉淀剂（甲醇）600 μL，振荡混匀约 1 min，于 4 ℃下以
          号110756-200110，纯度100.0%）均购自中国食品药品检                 23 755×g 离心 10 min。向洁净进样瓶中加入稀释剂
          定研究院；甲醇和甲酸均为色谱纯，氢氧化钠和醋酸铵                          （水）600 μL，再加入上述离心后的上清液300 μL，混匀，
          均为分析纯，水为超纯水。                                       备测。
          1.3  空白血浆                                          2.4  受试者待测血浆样品的处理
              空白血浆来自本研究所纳入的健康受试者，于其给                             精密吸取受试者待测血浆样品 200 μL，转移至 1.5
          药前采集、处理所得。                                         mL离心管中，加入甲醇10 μL（用于体积补偿）和内标工
          2 方法与结果                                            作溶液50 μL，其余步骤按“2.3”项下方法操作，备测。
          2.1  色谱与质谱条件                                       2.5  选择性试验
              色 谱 柱 为 Agilent ZORBAX Eclipse plus C8（4.6         分别取空白血浆 200 μL 按“2.3”项下方法处理（不
          mm×100 mm，3.5 μm），保护柱为 Phenomenex Security         加内标）后所得样品、空白血浆200 μL与大黄酸标准曲
               TM
          Guard C18 （4 mm×3.0 mm）；流动相为甲醇（A）-含0.4%            线工作溶液（20.00 μg/mL）10 μL 混匀后按“2.3”项下方
          甲酸的 5 mmoL/L 醋酸铵溶液（B），梯度洗脱（0～4.1                   法处理所得样品、某受试者餐后口服双醋瑞因胶囊（参
          min，75%A；4.1～4.2 min，75%A→95%A；4.2～5.2 min，        比制剂）50 mg后1.0 h的血浆样品按“2.4”项下方法处理
          95%A；5.2～5.3 min，95%A→75%A；5.3～8.0 min，            所得样品适量，按“2.1”项下条件进样分析，记录色谱图
          75%A）；流速为 1 000 μL/min；柱温为 30 ℃；进样量为              （图 1，空白血浆样品图略）。结果显示，大黄酸、内标的
          10 μL；分析时间为8.0 min。                                保留时间分别约为2.4、3.6 min，内源性物质不干扰大黄
              离 子 源 为 电 喷 雾 离 子 源（electrospray ionization，   酸和内标的测定。
          ESI），采用多反应监测（multi-reaction monitoring，MRM）        2.6 标准曲线绘制和定量下限考察
          模式进行负离子扫描；雾化气压力为344 738 Pa，加热辅                         按“2.3”项 下 方 法 制 得 大 黄 酸 质 量 浓 度 分 别 为
          助气压力为344 738 Pa；离子源温度为550 ℃；电喷雾电                   30.00、100.0、200.0、500.0、1 000、2 000、5 000、10 000


          中国药房    2022年第33卷第18期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18  ·2267·
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