Page 42 - 《中国药房》2022年17期

设置时间窗宽度为 0.1 min，对色谱峰进行多点校正，随 碱质量浓度分别为 2.734、5.469、10.938、21.875、43.750、
后进行 Mark 峰匹配，生成 20 批 KSC 的叠加指纹图谱， 87.500 μg/mL，连翘酯苷B质量浓度分别为4.688、9.375、
并采用中位数法生成对照指纹图谱（R），见图 1。20 批 18.750、37.500、75.000、150.000 μg/mL，毛蕊花糖苷质量
KSC 样品图谱与对照指纹图谱（R）的相似度分别为 浓 度 分 别 为 4.563、9.125、18.250、36.500、73.000、
1.000、0.997、0.999、0.999、0.999、1.000、0.999、1.000、 146.000 μ g/mL，金 石 蚕 苷 质 量 浓 度 分 别 为 5.250、
0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、1.000、0.998、0.999、 10.500、21.000、42.000、84.000、168.000 μg/mL，异毛蕊花
0.999、0.999、0.999、1.000，均大于 0.99，说明各批次样品 糖 苷 质 量 浓 度 分 别 为 5.469、10.938、21.875、43.750、
的质量较稳定、一致。共标记了12个共有峰；通过对比 87.500、175.000 μg/mL。取上述系列对照品混合溶液，
KSC供试品溶液（编号S4）和混合对照品溶液的色谱图， 按“2.1.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以各成
共指认出6个色谱峰，分别为去甲异波尔定（1号峰）、盐 分的质量浓度为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线
酸益母草碱（3 号峰）、连翘酯苷 B（5 号峰）、毛蕊花糖苷 性回归，结果见表1。结果表明，6种成分在其相应质量
（6号峰）、金石蚕苷（7号峰）、异毛蕊花糖苷（9号峰），结 浓度范围内与峰面积的线性关系良好。
果见图2。 表1 KSC中 6种成分的回归方程与线性范围
1 2 3 4 5 6 7 8 9 11 12 成分 回归方程 R 2 线性范围/（μg/mL）
2 000 10
1 800 去甲异波尔定 Y＝17.055X+4.501 4 0.999 9 1.625～52.000
盐酸益母草碱 Y＝12.943X+0.583 6 0.999 9 2.734～87.500
1 600
1 400 连翘酯苷B Y＝10.507X+1.243 0 0.999 9 4.688～150.000
1 200 毛蕊花糖苷 Y＝16.360X－2.576 1 0.999 8 4.563～146.000
U/mV 1 000 金石蚕苷 Y＝12.265X+13.759 0 0.999 9 5.250～168.000
800 异毛蕊花糖苷 Y＝3.402 1X+4.792 5 0.999 8 5.469～175.000
600
400 2.2.3 精密度试验 精密称取 KSC 内容物（编号 S1），
200
0 按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.3”项下色
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果显示，6种
t/min 成分峰面积的RSD均小于3.00％（n＝6），表明方法精密
图 1 20 批 KSC 样品的 UPLC 叠加指纹图谱及对照指
度良好。
纹图谱（R）
2.2.4 重复性试验 精密称取 KSC 内容物（编号 S1），
7
260 5 共 6 份，按“2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液，再按
240 1
220 “2.1.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并用外标法
200
180 6 9 KSC供试品溶液 计算 6 种成分的含量。结果显示，6 种成分含量的 RSD
160 3
U/mV 140 均小于3.00％（n＝6），表明方法重复性良好。
120
100 2.2.5 稳定性试验 精密称取 KSC 内容物（编号 S1），
80
60 按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别于室温下放置
40 混合对照品溶液
20 0、2、4、6、12、24 h 时按“2.1.3”项下色谱条件测定，记录
0
峰面积。结果显示，6 种成分峰面积的 RSD 均小于
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
t/min 3.00％（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置 24 h 内稳
1：去甲异波尔定；3：盐酸益母草碱；5：连翘酯苷B；6：毛蕊花糖苷；
定性良好。
7：金石蚕苷；9：异毛蕊花糖苷 2.2.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的 KSC 内
图 2 KSC 供试品溶液和混合对照品溶液的 UPLC 叠
容物（编号 S1）6 份，每份约 0.5 g，分别按与已知成分含
加图
量1 ∶ 1的比例加入混合对照品溶液，按“2.1.2”项下方法
2.2 含量测定 制备供试品溶液，再按“2.1.3”项下色谱条件进样测定，
2.2.1 专属性试验 取“2.1.1”项下混合对照品溶液、 记录峰面积并计算加样回收率。结果显示，去甲异波尔
“2.1.2”项下供试品溶液和空白对照溶液（50％甲醇），按 定、盐酸益母草碱、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、金石蚕苷、
“2.1.3”项下色谱条件下进样测定，记录色谱图（图略）。 异 毛 蕊 花 糖 苷 的 平 均 加 样 回 收 率 分 别 为 94.53％ 、
结果显示，空白对照溶液对6种成分的检测无干扰，提示 100.55％、99.92％、102.98％、97.85％、101.16％，RSD 均
方法专属性良好。 小于3.00％（n＝6），表明方法准确度良好。
2.2.2 线性关系考察 按“2.1.1”项下方法制备混合对 2.2.7 样品测定 取 20 批 KSC 内容物，按“2.1.2”项下
照品溶液，用 50％甲醇作溶剂，配制成系列浓度梯度的 方法制备供试品溶液，再按“2.1.3”项下色谱条件进样测
对照品混合溶液：去甲异波尔定质量浓度分别为1.625、 定，记录峰面积。每批样品平行测定3次，根据外标法计
3.250、6.500、13.000、26.000、52.000 μg/mL，盐酸益母草 算样品中各成分的含量，取平均值。结果见表2。

·2084 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 17 中国药房 2022年第33卷第17期