Page 38 - 《中国药房》2022年17期

2.4.3 正交偏最小二乘法-判别分析 将22个共有峰的 2.5 8种成分含量测定
峰面积数据采用Z-Score标准化处理后导入SIMCA 14.1 2.5.1 专属性试验 取供试品溶液（S1）和混合对照品
软件进行正交偏最小二乘法-判别分析，得到载荷散点 溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结
图、得分散点图和变量投影重要性（variable importance 果显示，8 种待测成分的色谱峰与相邻色谱峰的分离度
of projection，VIP）图，如图 5 所示。由图 5 可知，在置信 均大于1.5，峰形对称性良好；理论板数以黄芩苷峰计算
区间（95％）范围内，15 批 QM 可被分为 2 类，其中 S1～ 均大于6 000。在与绿原酸、阿魏酸、菊苣酸、橙皮苷、黄
S4及S9、S10为一类，其余批次样品为另一类，与聚类分 芩苷、丹酚酸B、黄芩素和丹皮酚对照品色谱图相对应的
析、主成分分析结果一致。载荷散点图中每个点代表一 位置上，供试品溶液色谱图中均有相应色谱峰出现（图
个共有峰自变量，其与原点距离越近，对样品差异的贡 2B）。
献率越小，反之贡献率就越大；而 VIP 图可以筛选出导 2.5.2 线性关系考察 精密量取“2.2.1”项下混合对照
致样品差异贡献较大的成分 [2 － 3] 。本研究以 VIP 值≥ 品溶液，加甲醇逐级稀释 0、1.5、3、4.5、6、7 倍，使之成为
1.0 作为参考值，共提取出了 5 个特征性成分，依次为峰 不同质量浓度的系列对照品混合溶液，按“2.1”项下色谱
14（黄芩苷）、峰 9（菊苣酸）、峰 18、峰 21（黄芩素）和峰 条件进样测定，记录色谱图。以对照品质量浓度为横坐
19，说明这 5 种成分可能是造成 QM 质量差异的标 标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，结果见表1。
志物。 表1 绿原酸等8种成分的线性关系考察结果
成分 线性回归方程 r 线性范围/（μg/mL）
4
绿原酸 Y＝1.514×10 X+129.914 0.999 7 41.411～289.877
60
4
阿魏酸 Y＝1.843×10 X－26.080 0.999 8 35.112～245.784
40 1 4
2 菊苣酸 Y＝2.283×10 X－8.482 0.999 9 16.816～117.712
20
4
橙皮苷 Y＝2.858×10 X－29.724 0.999 8 23.912～167.384
0 4
t0[1] 黄芩苷 Y＝2.629×10 X+213.685 0.999 9 111.515～780.605
－20 丹酚酸B Y＝1.466×10 X－86.195 0.999 8 15.606～109.242
4
－40 黄芩素 Y＝3.616×10 X－36.850 0.999 9 28.656～200.592
4
4
－60 丹皮酚 Y＝1.095×10 X－7.391 0.999 9 19.503～136.521
－80 2.5.3 精密度试验 精密量取“2.2.1”项下混合对照品
－250 －150 －50 0 50 150
t[1] 溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录色
A.得分散点图
谱图。结果显示，绿原酸、阿魏酸、菊苣酸、橙皮苷、黄芩
苷、丹酚酸 B、黄芩素和丹皮酚峰面积的 RSD 均不大于
0.2
1.8％（n＝6），表明仪器精密度良好。
X
0 2.5.4 重复性试验 取 QM 样品（S1），共 6 份，分别按
Y
“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件
－0.2
poso[1] 进样测定，记录色谱图，按外标法计算样品含量。结果
－0.4
显示，绿原酸、阿魏酸、菊苣酸、橙皮苷、黄芩苷、丹酚酸
－0.6
B、黄芩素和丹皮酚含量的 RSD 均不大于 1.1％（n＝6），
－0.8 表明方法重复性良好。
－0.6 －0.4 －0.2 0 0.2 0.4 0.6
pq[1] 2.5.5 稳定性试验 取同一供试品溶液（S1），在室温下
B.载荷散点图
放置0、6、12、24、48 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，
记录色谱图。结果显示，绿原酸、阿魏酸、菊苣酸、橙皮
3
苷、黄芩苷、丹酚酸B、黄芩素和丹皮酚峰面积的RSD均
2.5
不大于1.9％（n＝5），表明供试品溶液在室温下放置48 h
2
内稳定。
1.5
VIP值 1 2.5.6 加样回收率试验 取已知含量的样品（S1）适量，
按“2.2.2”项下方法平行制备9份供试品溶液。精密量取
0.5
“2.2.1”项下各对照品贮备液适量，制备与样品中成分含
0
－0.5 量相同的混合对照品溶液。将该混合对照品溶液按样
14 9 18 21 19 8 16 6 7 15 3 5 4 2 22 1 11 13 12 10 17 20 品含量的 0.5、1.0、1.5 倍加至供试品溶液中，混匀，按
峰号
C. VIP图 “2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果显示，
图5 15批QM的正交偏最小二乘法-判别分析结果 绿原酸、阿魏酸、菊苣酸、橙皮苷、黄芩苷、丹酚酸B、黄芩
·2080 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 17 中国药房 2022年第33卷第17期