Page 25 - 《中国药房》2022年16期
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2.3 动物分组与给药                                        清洗3次，以DAB试剂显色，经水洗、苏木精复染、脱水、
            造模成功后，将小鼠随机分为模型对照组、DOX组、                       封片后，使用显微镜观察并采集图像（苏木精染细胞核
        GA组、GA+DOX组，每组6只。模型对照组小鼠每天腹                        呈蓝色，DAB染CD31阳性表达细胞呈棕黄色），通过分
        腔注射生理盐水0.25 mL，DOX组小鼠隔天（即第1、3、5、                    析蛋白表达阳性率来反映CD31蛋白的表达水平。
        7、9、11、13、15天）尾静脉注射DOX药液（以生理盐水为                    2.9 小鼠心脏病理改变及心肌纤维化情况检测
        溶剂）2.5 mg/kg，GA 组小鼠每天灌胃 GA 混悬液（以                       末次给药后，取各组小鼠心脏，用生理盐水冲洗并
        0.5％羧甲基纤维素钠溶液为溶剂）30 mg/kg，GA+DOX                   用滤纸吸干，称定心脏质量并计算心脏指数：心脏指数＝心
        组小鼠每天灌胃GA混悬液30 mg/kg+隔天（同DOX组）                     脏质量/最终体质量。取心脏组织适量，于4％甲醛溶液
        尾静脉注射 DOX 药液 2.5 mg/kg，连续给药 15 d。各药                中固定72 h后，常规石蜡包埋、脱水、切片。采用酶联免
        物组剂量均依据本课题组前期预实验结果设置。                              疫吸附测定法以酶标仪检测其血清BNP、NT-pro BNP水
        2.4 小鼠一般生长状况检测                                     平，严格按照相应试剂盒说明书方法操作；取组织切片
            实验期间，观察各组小鼠的一般生长状况，称定其                         进行 HE 和天狼星红染色，分别观察其心脏病理改变和
        体质量并绘制体质量变化曲线；同时，计算各组小鼠的                           心肌纤维化情况。
        体质量变化百分比：体质量变化百分比（％）＝（最终体
                                                           2.10  统计学方法
        质量－最初体质量）/最初体质量×100％。
                                                               采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。数据以
        2.5 小鼠肿瘤组织生长情况检测
                                                           x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两
            治疗期间，每2天测量并计算肿瘤体积（V）：V＝（a×
                                                           比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
        b）×0.5（式中，a 为瘤体长度，b 为瘤体宽度），同时绘制                    3 结果
         2
        肿瘤生长曲线。末次给药 2 h 后，于眼球取血并处死小
                                                           3.1  GA联合DOX对小鼠一般生长状况的影响
        鼠，完整剥离肿瘤组织，称取瘤体质量并计算抑瘤率：抑
                                                               H22 荷瘤小鼠的造模成功率为 100％。实验期间，
        瘤率（％）＝（C－T）/C×100％（式中，C 为模型对照组小
                                                           各组小鼠饮食正常，除模型对照组和 DOX 组小鼠出现
        鼠的平均瘤体质量，T 为各药物组小鼠的平均瘤体质
                                                           精神萎靡外，其余各组小鼠的精神状况良好。
        量）。使用金氏公式来评估药物联合使用的效果（Q）：
                                                               实验期间，各组小鼠体质量均有所增加；与模型对
        Q＝EGA+DOX/[EGA+（1－EGA ）EDOX]（式中，EGA、EDOX和 EGA+DOX
                                                           照组比较，GA 组小鼠体质量变化百分比无明显变化
        分别表示 GA、DOX 单药及其联合使用的抑瘤率）。当
                                                           （P＞0.05），DOX组小鼠体质量变化百分比显著降低（P＜
        Q＜0.85时，表示两药作用拮抗；当Q为0.85～1.15时，表
                                                           0.01），GA+DOX组上述指标介于DOX组和GA组之间，但仍
        示两药作用相加；当Q＞1.15时，表示两药作用协同 。
                                                  [15]
                                                           显著低于模型对照组（P＜0.05）。结果见图1。
        2.6  小鼠血清AFP水平检测
            末次给药后，取各组小鼠血样，制备血清。取血清                           36
                                                             34
        适量，采用酶联免疫吸附测定法以酶标仪测定 AFP 水                           32                        40
                                                             30
        平，严格按照相应试剂盒说明书方法操作。                                  28                        30               b
                                                             26
        2.7  小鼠肿瘤组织病理观察及细胞凋亡情况检测                            体质量/g  24      模型对照组      体质量变化百分比/％  20  a
                                                             22
            末次给药后，取各组小鼠肿瘤组织适量，在4％甲醛                          20            DOX组        10
                                                             18            GA组
        溶液中固定72 h后，常规石蜡包埋、脱水、切片。取组织                          16            GA+DOX组      0
        切片进行 HE 染色，观察肿瘤组织病理改变情况并计算                             0  2  4  6  8  10  12  14  模型对 DOX  GA GA+DOX
                                                                                                        组
                                                                                                   组
                                                                                          照组
                                                                                               组
                                                                      时间/d
        肿瘤组织坏死面积百分比：肿瘤组织坏死面积百分比                                   A.体质量变化曲线               B.体质量变化百分比
       （％）＝肿瘤组织坏死面积/肿瘤总面积×100％。同时，取                            a：与模型对照组比较，P＜0.01；b：与模型对照组比较，P＜0.05
        组织切片进行TUNEL染色，观察肿瘤组织中细胞的凋亡                               图1 各组小鼠的体质量变化（x±±s，n＝6）
        情况并分析凋亡阳性率：凋亡阳性率（％）＝凋亡阳性细胞                         3.2 GA联合DOX对小鼠肿瘤组织生长的影响
        数/总细胞数×100％。                                           实验期间，各组小鼠的肿瘤生长速度依次为：模型
        2.8 小鼠肿瘤组织中CD31表达水平检测                              对照组＞GA 组＞DOX 组＞GA+DOX 组。经过 15 d 的
            采用免疫组化法进行检测。取各组小鼠肿瘤组织                          干预后，各药物组小鼠的瘤体体积和质量（P＜0.01）均
        适量，常规石蜡包埋、脱水、切片，切片脱蜡并经乙醇梯                          小于/低于模型对照组；与 DOX 组比较，GA+DOX 组小
        度水化、抗原修复后，用3％过氧化氢溶液孵育以阻断内                          鼠的瘤体质量均显著降低（P＜0.01）。结果见图 2、表
        源性过氧化物酶；用3％牛血清白蛋白在室温下孵育，加                          1。 DOX 组 、GA 组 、GA + DOX 组 的 抑 瘤 率 分 别 为
        入 CD31 一抗（稀释比例为 1 ∶ 500），4 ℃孵育过夜；加入                54.29％ 、42.50％ 和 89.29％ ；GA 与 DOX 联 用 的 Q 为
        相应二抗（稀释比例为1 ∶ 200），室温孵育50 min，用PBS                 1.21，提示两药联用表现为协同的抑瘤作用。


        中国药房    2022年第33卷第16期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16  ·1939 ·
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