Page 24 - 《中国药房》2022年16期

P＜0.01），while tumor weight of GA+DOX group was significantly lower than DOX group（P＜0.01）. Inhibitory rates of tumor in
3 administration groups were 54.29％，42.50％ and 89.29％ respectively，and Q of two-drug combination was 1.21. The tumor tissues
of mice in each administration group were necrotic to varying degrees；the serum level of AFP and the expression of CD31 in tumor
tissue were decreased significantly，compared with model control group（P＜0.05 or P＜0.01）；the percentage of necrosis area of
tumor tissue and the positive rate of apoptosis（except for single drug groups）were significantly increased（P＜0.05 or P＜0.01），while
positive rate of apoptosis in GA+DOX group was significantly higher than DOX group（P＜0.05）. Cardiac index of mice in DOX
group was significantly lower than model control group（P＜0.01）；serum levels of BNP and NT-pro BNP in DOX group and GA+
DOX group were significantly higher than model control group（P＜0.05 or P＜0.01）；pathological changes of heart and the degree of
myocardial fibrosis in GA+DOX group were lower than DOX group. CONCLUSIONS GA combined with DOX show synergistic
antitumor effect. GA can strengthen the apoptosis promoting effect of DOX，and can help to reduce the cardiotoxicity of DOX.
KEYWORDS ginkgo flavone aglycone；doxorubicin；efficacy enhancing and toxicity reducing；liver cancer；H22 tumor-bearing mice

银杏叶提取物是从银杏叶中提取的以黄酮类、萜内 赠；盐酸多柔比星原料药（批号N1111A，纯度＞98％）购
酯类等化合物为主要活性成分的天然药物 。研究表 自大连美伦生物技术有限公司；甲胎蛋白（alpha-fetal
[1]
明，银杏叶提取物具有抗氧化、抗肿瘤、保护神经系统等 protein，AFP）检测试剂盒（批号20210816）购自南京建成
药理作用，被广泛应用于心血管系统、神经系统、呼吸 生物工程研究所；B型钠尿肽（B-type natriuretic peptide，
[1]
系统疾病和肿瘤的辅助治疗 。银杏黄酮苷元（ginkgo BNP）、N末端脑钠肽前体（N-terminal probrain natriuretic
flavone aglycone，GA）是借助酶水解法除去银杏叶提取 peptide，NT-pro BNP）检测试剂盒（批号分别为 08/2021、
物中黄酮苷的糖基所获得的新型提取物，主要成分为槲 08/2021）均购自上海酶联生物科技有限公司；兔抗人血
[2]
皮素、山柰酚和异鼠李素 。与传统的银杏叶提取物相 小板-内皮细胞黏附分子 1（platelet-endothelial cell adhe-
比，GA具有更高的生物利用度和更强的生物活性 。多 sion molecule-1，又名 CD31）抗体（批号 GB113151）、辣
[3]
柔比星（doxorubicin，DOX）又称阿霉素，是临床治疗肝 根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗（批号GB23303）和苏
癌、淋巴瘤、乳腺癌等恶性肿瘤的一线化疗药物，但该药 木精-伊红（HE）染液、天狼星红染液、pH7.4 的磷酸盐缓
具有明显的心脏毒性、肾毒性、骨髓抑制等毒副作用（尤
冲液（PBS）、TUNEL试剂盒、DAB显色试剂盒均购自武
以心脏毒性最为严重），且在治疗过程中易诱发多药耐
汉塞维尔生物科技有限公司；RPMI-1640培养基购自美
药，已成为目前肿瘤临床治疗难以克服的瓶颈 [4－5] 。
国Gibco公司；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
中药对化疗药物的增效减毒作用是肿瘤治疗研究
1.3 细胞
的热点之一 。相关研究表明，中药的介入可明显减少
[6]
H22 小鼠肝癌细胞株购自武汉普诺赛生命科技有
化疗药物所致不良反应，提高化疗有效率，改善肿瘤患
限公司。
[7]
者的生存质量 。有研究表明，在肿瘤治疗过程中，DOX
1.4 实验动物
的多药耐药性主要由 P 糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）介
SPF级雄性ICR小鼠，体质量为16～20 g，购自辽宁
导，而DOX与P-gp抑制剂联合使用可增强DOX的抗肿
长生生物技术股份有限公司，生产许可证号为 SCXK
[8]
瘤活性 。此外，DOX所致氧化损伤是其引发心脏毒性
（辽）2020-0001。所有小鼠均饲养于温度 18～25 ℃、相
的主要原因 ，而槲皮素、山柰酚和异鼠李素均具有抗肿
[9]
对湿度50％～70％的动物房内，自由摄食、饮水，适应性
瘤、抗氧化和保护心脑血管系统等多种药理活性 [10－13] ，
饲养1周开始后续实验。本研究经贵州医科大学实验动
且三者都是 P-gp 抑制剂 。基于此，本课题组推测 GA
[14]
物伦理委员会批准，伦理批件号为NO2101200。
对 DOX 具有一定的增效减毒作用，故本研究以 H22 荷
2 方法
瘤小鼠为对象，初步探讨GA的增效减毒作用，旨在为银
杏资源的深度开发利用及临床抗肝癌联合用药方案的 2.1 细胞培养
选择提供参考。 将 H22 细胞接种于含 10％胎牛血清和 1％青-链霉
1 材料 素的RPMI-1640培养基中，在37 ℃、5％CO2细胞培养箱
1.1 主要仪器 中培养，每2～3天传代1次，共传代2次。收集对数生长
本研究所用主要仪器包括 680 型酶标仪（美国 期细胞，经台盼蓝染色并待细胞存活率大于 95％后，用
7
Bio-Rad 公司）、800DH 型 CO2细胞培养箱（美国 Thermo PBS稀释得1×10 个/mL的细胞悬液，备用。
Fisher Scientific 公司）、Eclipse E100 型正置光学显微镜 2.2 H22荷瘤小鼠模型建立
（日本Nikon公司）等。 取“2.1”项下 H22 细胞悬液经 2 次腹水传代后，用
1.2 主要药品与试剂 PBS稀释，制成2×10 个/mL的肿瘤细胞悬液。取上述肿
7
GA（槲皮素、山柰酚、异鼠李素含量分别为44.61％、 瘤细胞悬液0.2 mL于小鼠右腋皮下单次接种，以接种后
44.23％、4.77％）由贵州省生化工程中心何珺副教授惠 小鼠右腋出现肉眼可见瘤体为造模成功。

·1938 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16 中国药房 2022年第33卷第16期