Page 109 - 《中国药房》2022年16期

表1 Anti-ⅩⅩa和Anti-ⅡⅡa活性检测方法准确度与精密 制剂（Anti-Ⅹa活性）溶于基质中，在室温和2～8 ℃下放
度试验结果（n＝5或n＝6） 置27 h均稳定，在－25～－15 ℃、－90～－60 ℃下分别
理论活性/ 批内精密度CV 批内准确度 批间精密度CV 批间准确 总误差/ 放置 39、61 d 均稳定，反复冻融 6 次稳定。将受试制剂
待测活性
（IU/mL） 最大值/％ 范围/％ 最大值/％ 度/％ ％
Anti-Ⅹa活性 0.050 0（LLOQ） 18.9 －19.4～－1.6 14.3 12.8 27.1 （Anti-Ⅱa 活性）溶于基质中，在室温和 2～8 ℃下放置
0.100（LQC） 10.2 －3.3～17.0 9.4 8.0 17.4 27 h均稳定，在－25～－15 ℃、－90～－60 ℃下分别放
0.400（MQC） 3.7 －4.0～4.8 4.2 －1.0 5.2 置 40、61 d 均稳定，反复冻融 6 次稳定。将参比制剂
0.800（HQC） 4.1 －5.8～4.8 4.6 0.1 4.7
1.00（ULOQ） 14.5 －4.0～12.0 8.0 4.0 12.0 （Anti-Ⅱa 活性）溶于基质中，在室温和 2～8 ℃下放置
Anti-Ⅱa活性 0.018 0（LLOQ） 23.5 －18.9～11.1 16.0 －1.1 17.1 27 d均稳定，在－25～－15 ℃、－90～－60 ℃下分别放
0.050 0（LQC） 3.6 －14.4～－6.0 3.8 －8.8 12.6
0.100（MQC） 1.6 －10.6～－6.6 1.7 －8.2 9.9 置61 d均稳定，反复冻融6次稳定。
0.150（HQC） 1.5 －10.0～－3.3 3.0 －7.3 10.3 在冰水浴条件下，含标准品、受试制剂、参比制剂的
0.200（ULOQ） 2.0 －13.5～－3.0 3.7 －9.0 12.7
人全血样本（Anti-Ⅹa和Anti-Ⅱa活性）放置2 h均稳定。
CV：变异系数（coefficient of variation）
3 2种制剂的生物等效性及安全性评价
2.2.3 基质效应 取空白基质和混合空白基质，按
3.1 纳入与排除标准
“2.2.1”项下方法分别制备 ULOQ、LLOQ 样品和空白基
质水平选择性样品（Anti-Ⅹa 活性：10 批次；Anti-Ⅱa 活 本研究方案通过常州市第一人民医院伦理委员会
审核批准[伦理批件号（2020）药第02号]。
性：20 批次）。结果显示，在本方法条件下，在定量范围
内未见明显的基质效应。 健康受试者纳入标准包括：（1）18周岁及以上，男女
取空白溶血基质（Anti-Ⅹa 活性检测所用溶血基质 不限；（2）体质量不低于50 kg，体质量指数为19.0～26.0
2
的溶血体积比分别为0.25％、0.5％、1.0％，Anti-Ⅱa活性 kg/m ；（3）经生命体征、体格检查，血常规、尿常规、血生
检测所用溶血基质的溶血体积比分别为 0.25％、0.5％、 化检测，胸片（正位）/胸部CT检查，传染病筛查，凝血功
1.0％、2.0％）和混合空白基质，按“2.2.1”项下方法分别 能检查，妊娠试验（女性）和12导联心电图检查等，各指
制备 ULOQ、LLOQ 样品及其对应活性的空白基质水平 标均无异常或异常但无临床意义；（4）在未来6个月内无
选择性样品。结果显示，当溶血体积比≤0.25％时，空白 生育计划且自愿采取有效避孕措施；（5）充分了解试验
溶血基质对Anti-Ⅹa、Anti-Ⅱa活性的检测无影响。 目的、性质、方法和可能发生的不良反应，自愿参与本研
2.2.4 平行性 选用3个接近实测最大活性的临床样品 究并签署知情同意书，能够按照方案要求完成试验。
考察平行性。采用混合空白基质稀释上述样品，且保证 排除标准包括：（1）有过敏史（如哮喘、荨麻疹、湿疹
至少有3个稀释度样品的Anti-Ⅹa和Anti-Ⅱa活性落在 等）或过敏体质者，已知对本药成分或类似物、鱼精蛋白
定量范围内。结果显示，接近实测最大活性的临床样品 和橡胶过敏者；（2）药物滥用筛查阳性或酒精呼气测试
经混合空白基质稀释后，定量范围内样品活性值的 CV 阳性者；（3）有凝血功能障碍疾病史者，或在过去6个月
均满足相关标准，所有稀释度样品的测试结果（经稀释 内发生过增加出血风险相关事件者，或既往有颅内出
倍数校正）的精密度均满足相关标准 ，提示临床样品稀 血、胃肠道出血、紫癜、消化道溃疡疾病史者，或过去 30
[5]
释具有平行性。 d内接受过大手术者，或有活动性病理性出血、颅内出血
2.2.5 稀释效应和钩状效应 Anti-Ⅹa活性和Anti-Ⅱa 疾病史者；（4）经传染病筛查出现以下任一情况者：抗人
活性检测结果显示，在10、5倍ULOQ活性样品中均未观 类免疫缺陷病毒抗体阳性、乙肝表面抗原阳性、抗丙肝

察到钩状效应，样品在按最小稀释倍数进行稀释之前最 抗体阳性、抗梅毒螺旋体抗体阳性；（5）在筛选前3个月
[6]
多可以采用混合空白基质预稀释80、32倍。 有献血史或失血超过400 mL者 。
2.2.6 稳定性 标准品原始储备液（Anti-Ⅹa 和 Anti- 3.2 给药方案与血样采集
Ⅱa 活性）在－90～－60 ℃下放置 41 d 稳定；将其溶于 本试验采用开放、随机、单剂量、两序列、两周期交
基质中，在室温和2～8 ℃下放置27 h均稳定，在－25～ 叉设计，健康受试者采用区组随机化方法按1 ∶ 1分配到
－15 ℃、－90～－60 ℃下放置 62 d 均稳定，反复冻融 TR（受试制剂-参比制剂）组和RT（参比制剂-受试制剂）
（－80 ℃～室温，下同）6次稳定。 组。受试者均禁食过夜（至少10 h），并于给药前后禁水
将受试制剂（Anti-Ⅹa 活性）溶于基质中，在室温和 1 h。两组患者均于第1周期的第1天空腹皮下注射受试
2～8 ℃下放置 27 h 均稳定，在－25～－15 ℃、－90～ 制剂或参比制剂6 150 AⅩaIU，第2周期交叉给药，清洗
－60 ℃下放置61 d均稳定，反复冻融6次稳定。将参比 期为7 d。

中国药房 2022年第33卷第16期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16 ·2019 ·