Page 108 - 《中国药房》2022年16期
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低分子肝素是应用化学或酶解方式，将肝素解聚并                          浆）由 5 名健康人体抗凝血浆混合制得；空白溶血基质
        裂解成分子量1 000～12 000（平均4 000～6 000）的肝素               （血浆）的制备方法如下：将含柠檬酸钠抗凝剂的全血样
        片段，并以此所制成的一类分子量较小的肝素制剂                      [1－2] 。  品于≤－60 ℃条件下快速冷冻不少于30 min使血细胞
        低分子肝素的药理作用主要包括抗凝血、抗血栓、抗炎、                           破裂，解冻后于 2～8 ℃下以 2 500×g 离心 15 min，取上
        调节细胞增殖、抗肿瘤、预防腹部术后粘连、抗脂质代谢                           清液适量，与单一来源的空白基质混合，即得溶血体积
        紊乱、抗氧自由基生成等，主要用于心脑血管疾病、肾脏                           比分别为0.25％、0.5％、1.0％、2.0％的空白溶血基质。
        疾病、肝脏疾病、产科疾病和急性胰腺炎、扁平苔藓、癌
                                                            2 低分子肝素Anti-ⅩⅩa和Anti-ⅡⅡa活性的检测
                                        [3]
        症的临床治疗，以及术后血栓的预防 。那屈肝素钙是
                                                            2.1 分析方法
        一种低分子肝素，由普通肝素通过解聚和分离所得，较
                                                                使用Anti-Ⅹa、Anti-Ⅱa活性检测试剂盒，采用发色
        普通肝素具有更长的半衰期（t1/2 ） ；同时，该药具有明显
                                     [4]
                                                            底物法以多功能酶标仪测定人血浆样品中低分子肝素
        的抗凝血因子Ⅹa（anti-coagulation factor Ⅹa，Anti-Ⅹa）
                                                            的Anti-Ⅹa、Anti-Ⅱa活性。
        活性和较弱的抗凝血因子Ⅱa（anti-coagulation factor
                                                            2.2 方法学考察
        Ⅱ a，Anti- Ⅱ a）活 性 ，主 要 用 于 预 防 和 治 疗 血 栓 栓
                                                            2.2.1  标准曲线和定量下限          取低分子肝素适量，用空
        塞 。那屈肝素钙注射液原研药的商品名为速碧林                         ®
           [4]
                                                            白基质制备标准曲线样品。其中，Anti-Ⅹa 活性检测所
        （FRAXIPARINE ，注 册 证 号 H20181137），由 爱 尔 兰
                      ®
        Aspen Pharma Trading Limited公司研发。本研究所用国             用标准曲线样品的活性分别为 0.010 0、0.050 0[定量下
        产那屈肝素钙注射液（国药准字 H20193057）由常州千                       限（lower limit of quantification，LLOQ）]、0.080 0、0.125、
        红生化制药股份有限公司研发，根据其注册批件的要                             0.250、0.500、0.750、0.850、1.00[定量上限（upper limit of
        求，本研究拟探讨该受试制剂与参比制剂（原研药）在中                           quantitation，ULOQ）]IU/mL，Anti-Ⅱa活性检测所用标准

        国健康人群中的生物等效性和安全性，为国产制剂的进                            曲线样品的活性分别为0.010 0、0.018 0（LLOQ）、0.040 0、
        一步研究和应用奠定基础，为提高药品可及性、节约医                            0.060 0、0.080 0、0.120、0.160、0.200（ULOQ）IU/mL。检
        药成本提供支持。                                            测波长为 405 nm，参比波长分别为 450 nm（Anti-Ⅹa 活
        1 材料                                                性）和 455 nm（Anti-Ⅱa 活性）。采用 SoftMax Pro GxP
                                                                                                   ®
        1.1  主要仪器                                           5.4.1软件进行数据采集，采用Watson LIMS 7.4.1软件对
            本研究所用主要仪器包括 SpectraMax Plus 384 型               理论活性值与所测平均光密度（optical density，OD）值
        多功能酶标仪（美国 Molecular Devices 公司）、M37615              进行回归，采用五参数法对标准曲线所有有效活性水平
        型涡旋混合器（美国Thermolyne公司）、XS205型分析天                    样品进行逻辑拟合，权重因子为 1。本方法通过验证的
        平（瑞士Mettler Toledo公司）、Simplicity型纯水仪（德国             定量范围分别为0.050 0～1.00 IU/mL（Anti-Ⅹa活性）和
        Millipore公司）等。
                                                            0.018 0～0.200 IU/mL（Anti-Ⅱa活性）。
        1.2  主要药品与试剂
                                                            2.2.2  准确度与精密度        准确度与精密度评估将采用6
            本研究的受试制剂为那屈肝素钙注射液（国药准字
                                                            个验证分析批，由2名实验人员在2 d内完成。每个准确
        H20193057，批 号 851911010A，规 格 0.6 mL ∶ 6 150
                                                            度和精密度验证分析批包含1套新鲜配制的标准曲线样
        AⅩaIU），由常州千红生化制药股份有限公司生产；参比
                                                            品和空白对照样品以及 5 套 5 个活性水平的质控样品，
        制剂为那屈肝素钙注射液（注册证号 H20181137，批号
                                                            其中Anti-Ⅹa活性检测所用质控样品的活性分别为1.00
        5313A，规 格 0.6 mL ∶ 6 150 A Ⅹ aIU），由 法 国 Aspen
                                                           （ULOQ）、0.800[ 高 浓 度 质 控（high quality control，
        Notre Dame de Bondevile公司生产。
                                                            HQC）]、0.400[ 中 浓 度 质 控（moderate quality control，
            低分子肝素（批号Batch 10，Anti-Ⅹa活性100 IU/mL，
                                                            MQC）]、0.100[低浓度质控（low quality control，LQC）]、
        Anti-Ⅱa活性33 IU/mL）由欧洲药品质量管理局提供，用
        于配制标准曲线样品、质控样品和其他验证样品；Anti-                         0.050 0（LLOQ）IU/mL，Anti-Ⅱa活性检测所用质控样品
        Ⅹa 和 Anti-Ⅱa 活性检测试剂盒均购自法国 HYPHEN                    的 活 性 分 别 为 0.200（ULOQ）、0.150（HQC）、0.100
        BioMed公司；其余试剂均为分析纯，水为纯化水。                          （MQC）、0.050 0（LQC）、0.018 0（LLOQ）IU/mL。 按
        1.3  血浆                                            “2.2.1”项下方法检测并处理数据，结果见表 1。由表 1
            健康人体柠檬酸钠抗凝血浆（空白基质）来自武汉                          可见，在本方法条件下，Anti-Ⅹa活性和Anti-Ⅱa活性的
                                                                                                  [5]
        市传染病医院Ⅰ期临床试验研究室；混合空白基质（血                            批间和批内准确度和精密度均符合相关标准 。

        ·2018 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16                                 中国药房    2022年第33卷第16期
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