Page 48 - 《中国药房》2022年15期
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时珍在《本草纲目》中曰：“今人以怀庆地黄为上，亦各处                                    表1 不同种质的地黄样品信息
        随时兴废不同尔”，这说明自古以来河南一直为地黄的                            样品编号             种质      样品编号            种质
        道地产区，故河南产地黄亦称为“怀地黄”。                                S1～S3            85-5    S10～S12         BJ-1
                                                            S4～S6            金九      S13～S15         山东
            河南作为地黄道地产区，种植着不同种质（主要有
                                                            S7～S9            BX      S16～S18        QH-1
        85-5、金九、BX、BJ-1、山东、QH-1）的地黄         [1－2，5－6] ，不同种  2 方法与结果
                                   [5]
        质的地黄其表型性状差异较大 ，从而影响了地黄的道
                                                            2.1 地黄中总环烯醚萜苷的含量测定方法
        地性以及临床药效。2020版《中国药典》（一部）规定，地
                                                            2.1.1  供试品溶液的制备         精密称取地黄粉末约1.0 g，
                                       [7]
        黄的指标性成分为梓醇和地黄苷 D ，二者均属于环烯
                                                            加 70％乙醇 10 mL，称质量，超声提取 45 min；补足减失
                     [6]
        醚萜苷类成分 ；另外，已报道的地黄苷A也属于环烯醚
                                                            的质量，过滤，取续滤液至50 mL容量瓶中，加70％乙醇
        萜苷类成分，这类成分多以益母草苷为母体结构，具有
                                                            定容，摇匀；精密量取上述定容后的溶液 2.5 mL 于 50
        良好的免疫活性，还可促进神经功能恢复                   [8－11] 。由此推
                                                            mL 容量瓶中，再加 70％乙醇定容，摇匀，即得供试品
        测，环烯醚萜苷类成分可能是地黄的主要特征成分。基
                                                            溶液。
        于此，本研究以85-5、金九、BX、BJ-1、山东、QH-1 6种种
                                                            2.1.2  对照品溶液的制备          精密称取梓醇对照品 2.10
        质共18批地黄药材为研究对象，采用紫外分光光度法和
                                                            mg，置于 25 mL 容量瓶中，加 70％乙醇定容，经 0.22 μm
        高效液相色谱法测定总环烯醚萜苷、梓醇、地黄苷D、地
                                                            微孔滤膜过滤，即得梓醇质量浓度为 0.084 0 mg/mL 的
        黄苷 A 及益母草苷的含量，再利用聚类分析、因子综合
                                                            对照品溶液。
        分析及偏最小二乘判别分析（partial least squares dis-
                                                            2.1.3  待测样品的处理         取供试品溶液或对照品溶液
        criminant analysis，PLS-DA）等多元统计学方法对不同
                                                            1 mL，置于 10 mL 容量瓶中，加入 1 mol/L 盐酸溶液 2
        种质地黄的质量进行分析，以期为地黄的质量评价与控
        制提供参考。                                              mL，摇匀，于90 ℃水浴15 min；室温静置放冷，加2，4-二
        1 材料                                                硝基苯肼-乙醇溶液 0.5 mL，摇匀，于 90 ℃水浴 25 min；
        1.1  主要仪器                                           室温静置放冷，再加入1 mol/L NaOH-乙醇溶液3 mL，摇
            本研究所用主要仪器有 KQ-700DB 型数控超声波                      匀，室温静置1 h。以70％乙醇作为空白对照，采用紫外
                                                                      [12]
        清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、AL204型万分之一                         分光光度法 ，于462 nm波长下检测样品的吸光度。每
                                                            份样品重复测定3次。
        电 子 天 平 [ 梅 特 勒 - 托 利 多 仪 器（上 海）有 限 公 司]、
                                                            2.1.4 标准曲线的绘制 分别配制梓醇质量浓度分别为
        MS105DU 型十万分之一电子天平[奥豪斯仪器（上海）
        有限公司]、101-3AB 型电热恒温鼓风干燥箱（北京中兴                       0.017 6、0.034 4、0.043 1、0.053 8、0.067 2、0.084 0 mg/mL
        伟业仪器有限公司）、WFZUV-2000 型紫外-可见分光光                      的对照品溶液，按“2.1.3”项下方法测定吸光度，以梓醇
        度计[尤尼柯（上海）仪器有限公司]、Waters2695 型高效                    质量浓度为横坐标（X）、吸光度为纵坐标（Y），进行线性
        液相色谱仪（美国Waters公司）。                                  回归，得到总环烯醚萜苷的回归方程为 Y＝10.793 0X－
        1.2  主要药品与试剂                                        0.098 4（r＝0.999 2），检测质量浓度线性范围为0.017 6～
            本研究所用主要药品与试剂有梓醇（成都曼思特生                          0.084 0 mg/mL。
        物科技有限公司，批号MUST-17102510，纯度99.46％），                  2.1.5  精密度试验        取“2.1.2”项下对照品溶液，按
                                                                                                     [12]
        地黄苷 A、地黄苷 D（四川维克奇生物科技有限公司，批                        “2.1.3”项下方法处理后，采用紫外分光光度法 ，连续
        号分别为150513、150412，纯度均不低于98.00％），益母                  测定6次，记录吸光度值，计算得总环烯醚萜苷吸光度的
        草 苷 对 照 品（上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号              RSD为0.97％（n＝6），表明仪器精密度良好。
        L10A6Y2298，纯度98.00％），甲醇、无水乙醇（天津市致                   2.1.6  稳定性试验      取供试品溶液（编号S17）按“2.1.3”
        远化学试剂有限公司，分析纯），2，4-二硝基苯肼（天津                         项下方法处理后，于室温放置0、30、60、90、120、150 min
                                                                                  [12]
        市大茂化学试剂厂，分析纯）；其余试剂为实验室常用规                           后，采用紫外分光光度法 ，连续测定 6 次，记录吸光度
        格，水为蒸馏水。                                            值，计算得总环烯醚萜苷吸光度的 RSD 为 1.43％（n＝
            本研究所用 85-5、金九、BX、BJ-1、山东、QH-1 共 6               6），表明供试品溶液在室温放置150 min内稳定性良好。
        种种质地黄均来自于道地产区河南省焦作市温县武德                             2.1.7  重复性试验       称取 S17 样品 6 份，按“2.1.1”项下
        镇亢村地黄种植基地，每种种质地黄在其生长期内均统                            方法制备供试品溶液，再按“2.1.3”项下方法处理后，采
                                                                            [12]
        一管理。根据地黄的生长发育规律，在地黄成熟期进行                            用紫外分光光度法 测定吸光度，根据标准曲线计算总
        采收，每种种质地黄均随机选取10株长势一致的植株，                           环烯醚萜苷含量。结果显示，总环烯醚萜苷含量的RSD
        分别采集其块根。将新鲜地黄块根洗净，切成约 5 mm                          为3.86％（n＝6），表明该方法重复性良好。
        长的小块，于 55 ℃条件下干燥后，打粉过 50 目筛，保存                      2.1.8  加样回收率试验        精密称取S17样品9份，各0.5
        于干燥器中备用。不同种质的地黄样品信息见表1。                             g，按与已知成分含量0.5 ∶ 1、1 ∶ 1、1.5 ∶ 1的比例分别加入


        ·1834 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 15                                 中国药房    2022年第33卷第15期
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