Page 21 - 《中国药房》2022年14期

2.4 小鼠肝组织病理学检查及相关指标检测 a 空白组
2.4.1 肝组织病理学检查 取“2.2”项下固定于10％甲 模型组
醛溶液中的各组小鼠肝组织适量，用水冲洗，经乙醇梯 b b CAG低剂量组
度脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后，切片（厚度4～8 μm）。 40 CAG中剂量组
CAG高剂量组
[10]
参照文献方法 ，分别进行 HE 染色、Masson 染色、天狼 35
星红染色，置于显微镜下观察小鼠的肝组织病理情况并
拍照。HE染色结果采用Ishak评分法进行定量分析，HE 体质量/g 30
染色评分越高，表明肝损伤越明显；Masson 染色和天狼 25
星红染色结果采用 Image J 软件进行定量分析，结果以
20
胶原容积分数表示，胶原容积分数越高，即胶原阳性区
15
[10]
域越大，表明纤维化程度越高 。 0 10 20 30 40 50
2.4.2 collagen Ⅰ、α-SMA 表达检测 采用免疫组化法 时间/d
A.体质量变化
进行检测。取“2.2”项下固定于10％甲醛溶液中的各组
10 a
小鼠肝组织适量，用水冲洗，经乙醇梯度脱水、二甲苯透 b
明、石蜡包埋后，切片（厚度 5 μm）。切片用 3％H2O2溶 8
b
液室温孵育5～10 min以消除过氧化物酶活性，用pH7.4 b
的磷酸盐缓冲液（PBS）清洗2 min×3次，用5％正常山羊 6
血清封闭孵育以减少非特定结合。室温孵育60 min后， 肝脏指数/％
弃去血清；分别滴加collagen Ⅰ、α-SMA一抗（稀释比例 4
分别为 1 ∶ 200、1 ∶ 500），4 ℃孵育过夜；用 PBS 清洗 2
min×3次，滴加辣根过氧化物酶标记的IgG二抗（稀释比 2
例 1 ∶ 200），孵育 30 min；用 PBS 清洗 2 min×3 次后，在室
0
温下以 DAB 显色剂显色，用水冲洗后，用苏木精复染、
空白组 模型组 CAG低 CAG中 CAG高
二甲苯透明，以中性树脂封片，置于显微镜下观察并拍 剂量组 剂量组 剂量组
B.肝脏指数变化
照，采用 Image J 软件对阳性区域（棕褐色）的灰度值进 a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
行检测，并将其作为相应蛋白的表达水平。 图 1 各组小鼠体质量、肝脏指数的变化情况（x±±s，
2.5 小鼠糖酵解相关指标检测 n＝6）
取“2.2”项下各组小鼠血清和冻存的肝组织（肝组织
3.2 CAG对CCl4诱导的HF模型小鼠肝损伤指标的影响
需匀浆）适量，使用酶标仪，以化学比色法检测其血清中
与空白组比较，模型组小鼠血清中 ALT、AST 水平
LD 含量，以酶联免疫吸附测定法检测其血清及肝组织
均显著增加（P＜0.05）；与模型组比较，CAG各剂量组小
匀浆上清液中糖酵解关键酶（HK、PFK、PK）水平。严格
鼠血清中 ALT、AST 水平均显著降低（P＜0.05）。结果
按照相应试剂盒说明书操作。
见表1。
2.6 统计学方法
表 1 各组小鼠血清中 ALT、AST 水平的检测结果（x±±
采用 SPSS 22.0 软件对数据进行统计分析，采用
s，n＝6，U/L）
Graphpad Prism 7 软件作图。实验数据均以 x±s 表示，
组别 ALT AST
多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用双 空白组 5.00±0.82 12.00±0.82
因素方差分析。检验水准α＝0.05。 模型组 25.00±2.45 a 27.67±1.25 a
3 结果 CAG低剂量组 13.72±0.51 b 24.00±0.83 b
CAG中剂量组 9.37±0.59 b 21.00±0.82 b
3.1 CAG 对 CCl4诱导的 HF 模型小鼠体质量、肝脏指 CAG高剂量组 8.08±0.82 b 15.00±2.05 b
数的影响 a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
空白组小鼠体质量增长明显。与空白组比较，模型 3.3 CAG对CCl4诱导的HF模型小鼠HF的影响
组小鼠体质量整体呈下降趋势（P＜0.05）。与模型组比 HE染色结果显示，与空白组比较，模型组小鼠肝脏
较，CAG中、高剂量组小鼠体质量均有所增加（P＜0.05） 组织中可见肝细胞散在分布，索状排列不明显且间隙
并接近于空白组，其中CAG中、高剂量组的作用更为明 大，有明显的炎症细胞浸润和纤维化病变，且HE染色评
显。结果见图1A。 分显著升高（P＜0.05）；经不同剂量的CAG干预后，各剂
与空白组比较，模型组小鼠的肝脏指数显著升高 量组小鼠的肝损伤程度均较模型组有所减轻，其 HE 染
（P＜0.05）；与模型组比较，CAG各剂量组小鼠的肝脏指 色评分均显著降低（P＜0.05）。结果见图2、图3A。
数均显著降低（P＜0.05）。结果见图1B。 Masson染色和天狼星红染色结果显示，与空白组比

中国药房2022年第33卷第14期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14 ·1679 ·