Page 20 - 《中国药房》2022年14期
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损伤刺激下，HSCs将被激活，其活化和快速增殖被普遍                          测试盒（货号C009-2）、LD测试盒（货号A019-2）、己糖激
        认为是HF形成的中心环节，因此现阶段研究将HSCs作                          酶（hexokinase，HK）测试盒（货号 A077-1）、磷酸果糖激
        为HF疾病治疗的关键靶标 。有研究表明，在肝损伤过                           酶（phosphofructokinase，PFK）测试盒（货号A129）、丙酮
                                [2]
        程中，活化的 HSCs 受到 HF 微环境的影响，其能量代谢                      酸激酶（pyruvate kinase，PK）测试盒（货号 A076-1）均购
        方式将发生转变，由氧化磷酸化供能途径转变为糖酵解                            自南京建成生物工程研究所；兔抗小鼠α-平滑肌肌动蛋
        途径，后者具有葡萄糖摄取率高、糖酵解活跃、代谢产物                           白（α-smooth muscle actin，α-SMA）抗体（批号abs120451）、
        乳酸（lactic acid，LD）含量高的优势 。这样的能量代谢                   兔 抗 小 鼠 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白（collagen Ⅰ）抗 体（批 号
                                       [3]
        方式能为HSCs持续供能，有利于其持续活化，从而推动                          abs131984）均购自爱必信（上海）生物科技有限公司；辣
                     [3]
        HF的不断进展 。可见，HSCs糖酵解在HF中具有重要                         根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗
        作用，抑制糖酵解途径可抑制 HSCs 增殖、阻断 HSCs 向                    （批号 SA00003-2-20000121）购自武汉三鹰生物技术有
        肌成纤维细胞转化、抑制并改善 HF，可作为治疗 HF 的                        限公司；羧甲基纤维素钠（CMC-Na，批号 F0111021）购
        潜在策略。                                               自国药集团化学试剂有限公司；苏木精-伊红（HE）等染
            黄芪初载于《神农本草经》，味甘，性微温，“主痈疽，                       色试剂均购自阿拉丁试剂（上海）有限公司；磷钼酸（批
        久败疮，排脓止痛，大风癞疾，五痔，鼠瘘，补虚，小儿百                          号 51429-74-4-20191017）购自北京索莱宝科技有限公
           [4]
        病”。作为一种补益中药，黄芪被广泛应用于临床治疗                            司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为纯
        及日常保健。环黄芪醇（cycloastragenol，CAG）是从黄                  化水。
        芪中分离出的一种次生代谢产物，是由黄芪药理活性成                            1.3 实验动物
        分黄芪甲苷经水解而得。与黄芪甲苷相比，CAG的脂溶                               SPF级雄性ICR小鼠，体质量为20～25 g，由南京青
                                             [5]
        性更强，更容易通过细胞膜而被吸收入体 。近年来研                            龙山实验动物中心提供，生产许可证号为 SCXK（苏）
        究表明，CAG具有广泛的药理作用，如抗衰老、抗炎、减                          2017-0011。所有小鼠均饲养在 24 ℃恒温、12 h 黑暗/光
                                        [6]
        轻脑损伤、抑制肺纤维化、抗抑郁等 。此外有研究指                            照循环的动物房内，并自由摄食、饮水。本实验方案符
        出，黄芪、黄芪甲苷有抗HF的作用，CAG能有效改善非                          合 我 院 相 关 动 物 伦 理 要 求 ，伦 理 批 件 号 为 SYLL-
                         [7]
        酒精性脂肪性肝病 ，还能抑制阿霉素致小鼠肝脏脂质                            2021-005。
                           [8]
        过氧化物水平的升高 。同时亦有证据表明，CAG可通                           2 方法
        过激活糖代谢相关受体（如法尼醇 X 受体）来显著降低                          2.1  造模、分组与给药
        高脂饮食所致的肝脏脂质堆积，从而改善肝脏脂肪病                                 取 ICR 小鼠，适应性喂养 1 周后，随机分为空白组、
          [7]
        变 。由此可见，CAG可能通过调控能量代谢过程来发                           模型组和 CAG 低、中、高剂量组（60、120、240 mg/kg，以
        挥肝脏保护作用。基于此，本研究拟采用四氯化碳                              5％CMC-Na 溶液为溶剂       [9－12] ），每组 6 只。禁食过夜后，
        （CCl4 ）诱导的 HF 小鼠模型来探究 CAG 对其 HF 及糖酵                 模型组和各药物组小鼠均腹腔注射10％CCl4-橄榄油溶
        解的影响，旨在为阐释该成分抗HF作用（尤其是通过影                           液（5 mL/kg），每周 3 次，持续 8 周以复制 HF 模型；空白
        响糖酵解过程来发挥能量代谢调控作用）的机制提供                             组小鼠腹腔注射等体积橄榄油。自造模第4周起，各药
        参考。                                                 物组小鼠灌胃相应药液，空白组和模型组小鼠灌胃
        1 材料                                                0.5％CMC-Na溶液，灌胃量均为10 mL/kg，每天1次，持
        1.1  主要仪器                                           续4周。
            SpectraMax型多功能酶标仪购自美谷分子仪器（上                     2.2  小鼠体质量、肝脏指数的测定和样本采集
        海）有限公司；Ⅸ53 型光学显微镜购自日本 Olympus 公                         实验过程中，称定并记录小鼠体质量。末次灌胃
        司；RM2235 型石蜡切片机购自德国 Leica 公司；5424R                  后，小鼠禁食、不禁水过夜，于第 2 天摘眼球取血。血
        型 台 式 高 速 冷 冻 离 心 机 购 自 德 国 Eppendorf 公 司 ；         样静置 2 h 后，以 3 000×g 离心 15 min，取上层血清，于
        YD-6D 型组织包埋机、YD-A 型组织摊片机、YD-B 型组                    －20 ℃下保存。随后，将小鼠颈椎脱臼处死，剖取肝脏，
        织 烤 片 机 均 购 自 金 华 市 科 迪 仪 器 设 备 有 限 公 司 ；           称定质量并计算肝脏指数：肝脏指数＝肝脏质量/体质量
        YP502N型电子天平购自上海菁海仪器有限公司。                           （含末次灌胃前）×100％。迅速切取部分肝组织，置于
        1.2 主要药品与试剂                                         10％甲醛溶液中固定；剩余肝组织切块，于－80 ℃下
            CAG对照品（批号C14J9Q65733，纯度98％）购自上                  保存。
        海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司 ；CCl4（分 析 纯 ，批 号              2.3 小鼠肝损伤指标检测
        20180320）购自无锡市亚泰联合化工有限公司；天冬氨                            取“2.2”项下各组小鼠血清样品适量，使用酶标仪以
        酸转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）测试盒（货号          化学比色法检测其血清中 AST、ALT 水平，严格按照相
        C010-2）、丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）        应试剂盒说明书操作。


        ·1678 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14                                 中国药房    2022年第33卷第14期
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