Page 76 - 《中国药房》2022年13期
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肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉 Cistanche deserticola                  松果菊苷对照品（批号AF20051710，纯度98％）、毛
        Y.C.Ma 或管花肉苁蓉 Cistanche tubulosa（Schenk）Wight       蕊花糖苷对照品（批号AF20110904，纯度98％）、异毛蕊
        的干燥带鳞叶的肉质，主产于内蒙古、新疆、宁夏和甘肃                           花糖苷对照品（批号 AF20051701，纯度 98％）均购自成
                                    [1]
        等地区，素有“沙漠人参”之美誉 。研究表明，苯乙醇苷                          都 埃 法 生 物 技 术 有 限 公 司 ；1，3- 丁 二 醇（批 号
        类成分是肉苁蓉的主要功能性成分，且其含量最高，具                            C11230698，纯度99％）购自上海麦克林生化科技有限公
                                              [2]
        有抗氧化、抗病毒、保护神经和保肝等作用 。其中，松                           司；氯化胆碱（批号 RH221064，纯度 98％）、1，3-丙二醇
        果菊苷是文献记载的首个，也是植物界具有代表性的苯                           （批 号 RH210167，纯 度 98％）、1，4- 丁 二 醇（批 号
        乙醇苷类成分，同时其也是肉苁蓉中主要的指标性成                             RH273071，纯度 99％）、丙二酸（批号 RH246485，纯度
          [3]
        分 。支雅婧等 从化学成分特有性、可测性、传统功效                           99.5％）、DL-苹果酸（批号RH246485，纯度99.5％）、硫酸
                      [4]
        和药性等方面进行预测，指出毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖                            亚铁（批号RH246512，纯度98％）、1，1-二苯基-2-三硝基
        苷和松果菊苷可作为肉苁蓉的质量标志物。                                 苯 肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazy，DPPH）（ 批 号
            目前，针对肉苁蓉中苯乙醇苷类成分提取的研究大                          RH207202，纯度≥98.5％）均购自上海易恩化学技术有
        多采用50％甲醇为溶剂，具有毒性大、易挥发、易造成环                          限公司；维生素C（vitamin C，VC）（批号20210525，纯度≥
                                              [7]
        境污染及提取效率低等缺点             [5－6] 。Abbott 等 于 2003 年   99.7％）购自天津市鼎盛鑫化工有限公司；尿素（批号
        首次发现一种可替代传统溶剂和离子液体的新型绿色                             20190410，纯度≥99％）、葡萄糖（批号20190529，纯度≥
        低共熔溶剂（deep eutectic solvents，DESs），其具有低蒸            99％）均购自天津市凯通化学试剂有限公司；乳酸（批号
        汽压、低成本、良好的生物降解性和生物相容性等优                             980826，纯度 90％）购自天津市化学试剂一厂；乙腈、甲
                                   [8]
        点。随着研究的深入，Choi 等 又发现了 DESs 的类似                      醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
        物——天然低共熔溶剂（natural deep eutectic solvents，          2 方法与结果
        NADESs）。与 DESs 相比，NADESs 的组成成分均为天                   2.1  松果菊苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷含量测定
        然化合物或生物体初级代谢产物，因此，其经济性和环                                采用高效液相色谱法进行测定。色谱条件：采用
        境保护作用均优于 DESs，已作为一种绿色可调节的提                          Supersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈
                                        [9]
        取介质应用于药物活性成分的提取中 。                                 （A）-0.1％磷酸水溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～9
            响应曲面法（response surface methodology，RSM）是        min，90％B→83％B；9～18 min，83％B→80％B；18～30
        一种优化工艺条件的有效方法，被广泛用于多因素的实                            min，80％B）；流速为 1.0 mL/min；柱温为 30 ℃；检测器
        验优化。箱式组合设计（Box-Behnken Design，BBD）是                 为紫外检测器；检测波长为330 nm；进样量为10 μL。按
        RSM 中最常用的实验设计方案，具有实验次数少、简单                          照 2020 年版《中国药典》（四部）“9101 分析方法验证指
                                                                                 [12]
                    [10]
        和经济的优点 。遗传算法（genetic algorithm，GA）具有                导原则”进行方法学考察 ，结果均满足要求。
        全局寻优的特点，能取得较好的优化和预测效果，在生                            2.2  NADESs的筛选
        物活性物质提取方面具有很大潜力 。鉴于此，本研究                            2.2.1  不同组成 NADESs 的制备         根据文献[13]方法，
                                       [11]
        拟采用 RSM 结合 GA 优化 NADESs 提取肉苁蓉中苯乙                    分别以氯化胆碱、多元醇和有机酸等为原料，以水为溶
        醇苷类成分（松果菊苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷）的                           剂，制备 11 种 NAEDSs（表 1），具体方法为：按照组成成
        工艺，以期为肉苁蓉的绿色提取和高值化利用提供                              分摩尔比将原料置于各自锥形瓶中，在 80 ℃下加热搅
        参考。                                                 拌，直至形成均匀透明的液体，冷却至室温后备用。
        1 材料                                                          表1 11种NADESs的组成情况
        1.1 主要仪器                                            NADESs名称    原料1          原料2       原料1和原料2的摩尔比
                                                            NADES-1     氯化胆碱         1，3-丙二醇        1∶2
            本研究所用的主要仪器有 Thermo U3000 型高效液                   NADES-2     氯化胆碱         1，3-丁二醇        1∶2
        相色谱仪、Multiskan GO 型酶标仪（美国 Thermo Fisher             NADES-3     氯化胆碱         1，4-丁二醇        1∶2
                                                            NADES-4     氯化胆碱         乳酸             1∶2
        Scientific公司），BSA224S-CW型电子分析天平（北京赛
                                                            NADES-5     氯化胆碱         丙二酸            1∶2
        多利斯科学仪器有限公司），TDZ5-WS型多管架自动平                         NADES-6     氯化胆碱         DL-苹果酸         1∶2
        衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司），KQ-500E型                        NADES-7     氯化胆碱         尿素             1∶2
        超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。                                NADES-8     氯化胆碱         葡萄糖            1∶2
                                                            NADES-9     1，4-丁二醇      乳酸             1∶2
        1.2 主要药品与试剂                                         NADES-10    1，4-丁二醇      DL-苹果酸         1∶2
            肉苁蓉药材（批号190802003）购自内蒙古聚诚中药                     NADES-11    1，4-丁二醇      丙二酸            1∶2
        饮片有限公司，由包头医学院药学院安明教授鉴定为肉                            2.2.2  样品溶液的制备及提取效率的计算                 取肉苁蓉
        苁蓉 C. deserticola Y.C.Ma 的干燥带鳞叶的肉质。将其               粉末 0.3 g，精密称定，置于 100 mL 锥形瓶中，分别加入
        干燥，粉碎（过四号筛），备用。                                     不同组成的 NADESs 及传统溶剂（50％甲醇，对照）适


        ·1606 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 13                                 中国药房    2022年第33卷第13期
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