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表 5   各样品对 DPPH 自由基和羟基自由基的 IC50 和                   加及提取时间的延长，目标成分的总提取效率均呈先升
              AEAC测定结果（n＝3）                                 高后降低的趋势。合适的液料比有助于溶质中目标成
                         DPPH自由基            羟基自由基           分向溶剂扩散。过短的提取时间不足以破碎药物细胞
         样品
                    IC50/（μg/mL） AEAC/（mg VC/g）  IC50/（μg/mL） AEAC/（mg VC/g）  壁，过长的提取时间则会使目标化合物发生降解。在单
         NADES-11提取物  261.17   17.19     744.34   360.80
         50％甲醇提取物    420.97    10.67    1 175.12  228.54    因素实验基础上，经BBD实验联合GA优化并进行修正
         VC            4.49              268.56             后得 NADES-11 的最佳工艺条件为：NADES-11 中 1，4-
            （2）羟基自由基清除实验。参考文献报道的方                           丁二醇和丙二酸的摩尔比 1 ∶ 2.5、NADES-11 含水量
          [20]
        法 ，取7.5 mmol/L的邻二氮菲20 µL、0.2 mol/L的磷酸               18％ 、液 料 比 30 mL/g、提 取 时 间 30 min、提 取 温 度
        盐缓冲液40 µL和样品溶液30 µL于96孔板中，混匀，再                      30 ℃。经验证，目标成分总提取效率的实测值（1.82％）
        加入 7.5 mmol/L 的 FeSO4溶液 20 µL 和 0.1％H2O2溶液          与预测值（1.83％）接近，表明模型优化工艺条件准确、
        20 µL，在 37 ℃下恒温反应 60 min，采用酶标仪在 536                 可行。
        nm波长处检测A。同时，将样品溶剂（水）代替样品同法                              综上所述，本研究以优化的 NADESs 为提取溶剂，
        操作后所得结果记为 A0；将样品溶剂（水）代替样品，同                         提取肉苁蓉中苯乙醇苷类成分的工艺稳定、可行，符合
        时以水代替0.1％H2O2同法操作后所得结果记为A1。计                        天然产物绿色提取的理念。但是，由于药物处理量的大
        算各样品对羟基自由基的清除率：羟基自由基清除率                             小悬殊，实验室和工业生产之间的差别较大，而本实验
        （％）＝（A－A0 ）/（A1－A0 ）×100％。每个质量浓度设置 3                样品量较小，很难对NADESs工业提取中的许多因素进
        个复孔。按照“2.5.2（1）”项下方法计算各样品对羟基自                       行充分考察。因此，本提取工艺若要应用于工业大生
        由基的 IC50和 AEAC。结果显示，在研究质量浓度范围                       产，还应该经过实验室放大、中试和工业放大的数据
        内，各样品对羟基自由基均有一定的清除活性，其强弱                            验证。
        顺序依次为 VC＞NADES-11 提取物＞50％甲醇提取                       参考文献
        物。结果见表5。                                            [ 1 ]  毕萃萃，刘银路，魏芬芬，等.肉苁蓉的主要化学成分及生
        3 讨论                                                     物活性研究进展[J].药物评价研究，2019，42（9）：1896-
                                                                 1900.
            NADESs 作为一种新型的绿色可调节溶剂，与传统
                                                            [ 2 ]  熊慧，刘宇琦，屈文佳，等.酒苁蓉HPLC特征图谱及5个
        溶剂相比，具有较高的提取效率及良好的生物降解性、
                                                                 苯乙醇苷类成分含量测定[J].药物分析杂志，2019，39
        生物相容性、稳定性和可回收性等优点 。Dai等 研究
                                                  [22]
                                         [21]
                                                                （2）：233-239.
        表明，与水和 40％乙醇相比，NADESs 提高了红花中酚
                                                            [ 3 ]  颜贵卉，田金虎，龙本文，等.肉苁蓉中苯乙醇苷类成分的
        类物质在高温、光照和长期放置等条件下的稳定性。熊
                                                                 研究进展[J].中南药学，2012，10（9）：692-695.
        苏慧等 对以NADESs为溶剂得到的玉竹总黄酮提取液                          [ 4 ]  支雅婧，甄亚钦，田伟，等.肉苁蓉化学成分和药理作用研
              [23]
        进行纯化回收，发现 NADESs 可被回收再次利用，且回                             究进展及质量标志物（Q-Marker）的预测分析[J].中草
        收后的 NADESs 再次用于提取时也取得了较好的提取                              药，2021，52（9）：2758-2767.
        效率（回收利用率为94.56％）。并且，NADESs的组成成                      [ 5 ]  孔征，毛乐静，霍仕霞，等.Box-Behnken响应面法优化管
        分在自然界中大量存在，具有成本低和生物可再生的特                                 花肉苁蓉中毛蕊花糖苷的提取工艺研究[J].中国药房，
        性。此外，NADESs 由天然的初级代谢物组成，被认为                              2019，30（14）：1970-1974.
        是低毒或无毒的环境友好型提取溶剂，可以直接纳入药                            [ 6 ]  初侨，席兴军，杨丽.肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷闪
        物、食品等配方中，不需额外进行纯化                 [24－25] 。故本研究          提工艺研究[J].食品研究与开发，2015，36（16）：49-52.
        使用 NADESs 代替有机溶剂用于肉苁蓉中苯乙醇苷类                         [ 7 ]  ABBOTT A P，CAPPER G，DAVIES D L，et al. Novel sol-
                                                                 vent properties of choline chloride/urea mixtures[J]. Chem
        成分的提取，具有科学性和可行性。
                                                                 Commun（Camb），2003（1）：70-71.
            本研究结果显示，不同组成的 NADESs 对松果菊
                                                            [ 8 ]  CHOI Y H，VAN SPRONSEN J，DAI Y T，et al. Are natural
        苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的提取效率不同，笔者
                                                                 deep eutectic solvents the missing link in understanding
        认为主要是黏度不同导致的——黏度较低的 NADESs
                                                                 cellular metabolism and physiology?[J]. Plant Physiol，
        有利于目标成分的扩散。因此，在NADES-11含水量的                              2011，156（4）：1701-1705.
        考察中，随着其含水量的增加，黏度降低，目标成分提取                           [ 9 ]  周立锦，董哲，杜会枝.低共熔溶剂在中药成分提取中的
        效率也随之升高；然而当含水量大于 20％时，目标成分                               研究进展[J].中草药，2020，51（1）：236-244.
        提取效率呈降低趋势，这可能是由于过多的水会破坏                             [10]  杨家强，车万莉，彭红艳，等. Box-Behnken响应面法优化
        NADES-11的氢键网络并改变其极性。随着液料比的增                              荜茇总生物碱的提取工艺研究[J].中国药房，2018，29


        ·1610 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 13                                 中国药房    2022年第33卷第13期
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